果糖-1,6-二磷酸酶（FBP）检测试剂盒（紫外分光光度法）
产品货号：BA
产品规格：50管/48样
产品简介：
果糖-1,6-二磷酸酶（Fructose1,6-bisphosphatase，FBP）又称果糖-1,6-二磷酸酯酶，其在糖异生过程和光合作用同化物蔗糖的合成中起关键性的作用。催化1,6-二磷酸果糖和水生成6-磷酸果糖和无机磷。
FBP催化1,6-二磷酸果糖和水，生成6-磷酸果糖和无机磷，在反应体系中添加的磷酸葡萄糖异构酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，测定nm下NADPH的增加速率，即可计算FBP活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成：
溶液的配制：
1.试剂一：临用前加入45mL试剂四充分溶解待用，用不完的试剂于4℃保存。
2.试剂二：液体置于试剂瓶内EP管中。临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融。
3.试剂三：液体置于试剂瓶内EP管中。临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融。
试验中所需的仪器和试剂:
紫外分光光度计、天平、低温离心机、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰盒、蒸馏水。
操作步骤(仅供参考)：
一、样品处理理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。于4℃，g，离心10min，取上清，置冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（个）：提取液体积（mL）为~：1的比例（建议万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min），于4℃，g，离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
2.将试剂一37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10min。
3.操作表：(在1mL石英比色皿中依次加入下列试剂)。
在1mL石英比色皿中分别加入上述试剂，充分混匀后于nm处测定10s时的吸光值A1，迅速置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min，拿出迅速擦干测定s时的吸光值A2，计算ΔA测定管=A2测定-A1测定，ΔA空白管=A2空白-A1空白，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管。（空白管只需做1-2次）
三、FBP含量计算
1.按蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP（U/mgprot）=ΔA÷（ε×d）××V反总÷(Cpr×V样)÷T=.5×ΔA÷Cpr
2.按样本质量计算
单位的定义：每g组织每分钟生成1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP（U/g质量）=ΔA÷（ε×d）××V反总÷(W×V样÷V样总)÷T=.5×ΔA÷W
3.按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每个细菌或细胞每分钟生成1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP（U/cell）=ΔA÷（ε×d）××V反总÷(V样÷V样总×细胞数量（万个）)÷T
=.5×ΔA÷细胞数量（万个）
V反总：反应体系总体积，1×10-3L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；：单位换算系数，1mol=nmol。
注意事项：
1.当ΔA大于0.6时，建议将样本稀释后再进行测量。
2.空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.02。