果胶裂解酶活性检测试剂盒（可见分光光度法）
产品货号：BA
产品规格：50管/24样
产品简介：
果胶裂解酶（EC4.2.2.10）是果胶酶的重要组成部分，催化果胶分子链的消除裂解。来源比较广泛，主要来源于微生物，在食品加工工业中提高果汁产量方面有重要意义，在减少环境污染和降低能源消耗方面也具有潜在的应用价值。
果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4糖苷键，生成在还原端C4和C5之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸，在nm处有特征吸收峰，测定nm下吸光度的上升来表示果胶裂解酶的活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品内容：
溶液的配制：
试剂一：溶液中如果有沉淀存在，可以50℃水浴助溶。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、恒温水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（个）：提取液体积（mL）为~：1的比例（建议万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。
3.培养液：直接测定。
二、测定操作
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
2.操作表：(在1.5mL离心管中)。
三、果胶裂解酶活性计算
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL活性（U/mgprot）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷（V样×Cpr）÷T=64.1×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每克组织每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL活性（U/g质量）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷（V样×W÷V样总）÷T=64.1×ΔA÷W
3.按照细菌、真菌数量计算
酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每个细胞每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL活性（U/cell）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T=64.1×ΔA÷细胞数量
4.按照培养液体积计算
酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL活性（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷V样÷T=64.1×ΔA
ε：不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数：L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.L；V样：反应体系中样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，30min；：换算系数，1mol=nmol。
注意事项：
1.若ΔA大于0.5，将粗酶液用蒸馏水稀释后再进行测定。若A测定管大于1.5时，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。
2.建议一次测定不要测定过多样本以免耽误过多的酶促反应时间。
3.空白管正常情况下变化不超过0.02。