硝酸还原酶（NR）活性检测试剂盒（微量法）
产品货号：BA
产品规格：管/96样
产品简介：
NR（EC1.7.1.3）广泛存在于植物中，是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶，也是诱导酶，对作物的产量和品质有影响。NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3ˉ+NADH+H＋→NO2ˉ+NAD＋+H2O，NADH在nm下有特征吸收峰，nm下吸光值的变化即可表示酶活。注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。产品组成：
溶液的配制：
1.诱导剂储备液：用蒸馏水10倍稀释后使用，即取10mL诱导剂储备液加90mL蒸馏水，充分混匀。现配现用。2.试剂二：临用前加入2mL提取液溶解，可分装后-20℃保存，避免反复冻融。-20℃保存2周。需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1.取适量诱导剂于烧杯中，将新鲜标本洗净，滤纸吸干，放入诱导剂应用液中（淹没即可）避光，浸泡2h，取出样本，滤纸吸干后，-20℃冷冻30min，取出样本，滤纸吸干。（根据需要进行诱导处理）2.称取约0.1g样本，加入1mL提取液，冰浴研磨，g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。二、测定步骤
1.分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。2.样本测定（在EP管中加入下列试剂）充分混匀后测定nm下的初始值A1，25℃（其他物种）或37℃（哺乳动物）反应30min后再次测定吸光值A2，计算ΔA测定管=A1测定管-A2测定管，ΔA空白管=A1空白管-A2空白管，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管。（空白管只需测1-2次）三、NR活性计算
1.按微量石英比色皿计算：（1）按样本质量计算：
酶活单位定义：每小时每g样本中消耗1μmolNADH的量为一个NR活力单位。NR（U/g质量）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×]÷(W÷V提取×V样)÷T=5.×ΔA÷W（2）按样本蛋白浓度计算：酶活单位定义：每小时每mg组织蛋白消耗1μmolNADH的量为一个NR活力单位。NR（U/mgprot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×]÷(V样×Cpr)÷T=5.×ΔA÷CprV反总：反应体系体积，2×10-4L；V样：吸取样本体积，0.mL；V提取：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，0.5h；ε：NADH的摩尔消光系数，L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；：单位换算系数，1mol=μmol。2.按96孔UV板计算：将上述公式中的d-1cm换为d-0.6cm（96孔板光径）进行计算即可。注意事项：
1.当测定的吸光值大于1.5或者ΔA大于0.5时，建议将上清液稀释后测定。2.ΔA测定过小（小于0.01），可延长酶促反应时间。3.建议一次测定不要测定过多样本以免耽误过多的酶促反应时间。4.空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.05。