单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
MDHAR催化MDHA还原生成AsA，在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。
测定原理：
MDHAR催化NADH还原MDHA生成AsA和NAD+，NADH在nm有特征吸收峰，但是NAD+没有。通过测定nm光吸收下降速率，来计算出MDHAR活性。
需自备的仪器和用品：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和双蒸水。
试剂组成和配置：
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体50mL×1瓶，室温保存。
试剂三：粉剂×1瓶（棕色），4℃保存。临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。
试剂五：液体25μL×1瓶，4℃保存。临用前加5mL试剂二充分溶解。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（个）：试剂一体积（mL）为~：1的比例（建议万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；g，4℃离心20min，取上清液置冰上混匀待测。
3、血清等液体：直接测定。
MDHAR测定操作：
1、分光光度计预热30min，调节波长到nm，蒸馏水调零。
2、试剂二在25℃水浴锅中预热30min。
3、依次在比色皿中加入μL试剂三、μL试剂四、μL试剂五和μL试剂二，最后加入μL上清液，迅速混匀后于nm比色，记录30s和s的吸光值A1和A2，△A=A1-A2。
MDHAR活性计算公式：
(1).按蛋白浓度计算
MDHAR活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmolNADH为1个酶活单位。
MDHAR(nmol/min/mgprot)=△A÷ε÷d×V反总×]÷（Cpr×V样）÷T=×△A÷Cpr
(2).按样本质量计算
MDHAR活性单位定义：25℃中每克样本每分钟氧化1nmolNADH为1U。MDHAR(nmol/min/g鲜重)=△A÷ε÷d×V反总×]÷（W×V样÷V样总）÷T=×△A÷W
(3).按细胞数量计算
MDHAR活性单位定义：25℃中每个细胞每分钟氧化1nmolNADH为1个酶活单位。
MDHAR(nmol/min/cell)=△A÷ε÷d×V反总×÷（细胞数量×V样÷V样总）÷T=×△A÷细胞数量
(4).按液体体积计算
MDHAR活性单位定义：25℃中每毫升液体每分钟氧化1nmolNADH为1个酶活单位。
MDHAR(nmol/min/mL)=△A÷ε÷d×V反总×÷V样）÷T=×△A
ε：NADH摩尔消光系数，L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，
1mL=0.L，V样：加入反应体系中上清液体积，μL=0.1mL；Cpr：上清液蛋白浓度，
mg/mL，蛋白质浓度需要另外测定，建议使用本公司蛋白质含量BCA试剂盒；V样总：加入提取液体积，1mL；W，样本质量，g；T：反应时间，2min。
注意事项：
临用前配制的试剂未使用完的4℃保存，3天内使用完。
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