谷胱甘肽S-转移酶活性检测试剂盒（货号：AKPR）
谷胱甘肽S-转移酶（GST）是一种由多个基因编码、具有多种细胞功能的蛋白，广泛存在于动物、植物、微生物等多种生物组织中，具有参与初生代谢、次生代谢、解毒和保护植物免受氧化损伤及异源物质隔离等作用，并可作为配体蛋白在植物激素代谢方面发挥着重要作用。
谷胱甘肽S-转移酶催化还原型谷胱甘肽（GSH）与CDNB（1-Chlom-2,4-Dinitrobenzene,cDNB）结合生成GS-DNB，产物在nm处具有特征吸收峰，通过吸光值变化即可表征谷胱甘肽S-转移酶的活性。
谷胱甘肽S-转移酶活性检测原理测定过程中所需要的仪器和试剂：紫外分光光度计、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.粗酶液的制备（可根据预实验结果适当调整样本量及比例）
①组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：（5-10）的比例（建议称取0.1g组织，加入1mL试剂一）处理样品，冰浴匀浆，4℃g离心10min，取上清置于冰上待测。
②细菌或细胞：离心收集细菌或细胞至离心管内，按照细菌或细胞数量（10个）：试剂一体积（mL）为（-）：1的比例（建议万细菌或细胞加入1mL试剂一）处理样品，冰浴超声破碎（功率W，超声3s，间隔7s，总时间3min），4℃g离心10min，取上清置于冰上待测。
③血清（浆）、培养液等液体样本：直接测定或适当稀释后再进行检测。
吸光值测定：①迅速混匀并开始计时，测定10s（总时间）时nm处吸光值，记为A1测定和A1空白；②37℃（哺乳动物）或25℃（一般物种）准确反应s，测定s（总时间）时nm处吸光值，记为A2测定和A2空白；③计算A测定=A2测定-A1测定，A空白=A2空白-A1空白，A=A测定-A空白。注：空白组只需测定1-2次。
注意事项
①样品处理等过程均需要在冰上进行以免失活，粗酶液制备完成后须当天完成测定；
②测定细胞中GST活性时，细胞数目建议在-万之间，细胞中GST的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞；
③若测定吸光度大于1，建议将粗酶液使用蒸馏水稀释后再进行测定，计算时相应修改；
④反应过程中应保持37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）恒温，建议在烧杯中装入适量37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）蒸馏水，将此烧杯放入37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）恒温水浴中，在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中；
⑤准确在10s和s处完成读数，以保证实验结果的准确性；
⑥为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。
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