抗坏血酸含量检测试剂盒(货号:AKVI)
抗坏血酸(AsA)又称维生素C(VitaminC),是一种具有烯醇式己糖内脂立体结构的酸性己糖内酯化合物,是生物有机体代谢过程中一类非常重要的营养元素,可作为辅酶、抗氧化剂、自由基清除剂、电子供体/受体和生物合成底物等,在生物代谢过程中发挥着重要作用。
抗坏血酸氧化酶(AscorbateOxidase)可催化抗坏血酸氧化生成脱氧抗坏血酸(Dehydroascorbate),抗坏血酸在nm处具有特征吸收峰,通过测定其氧化速率即可定量检测抗坏血酸的含量。
抗坏血酸含量检测原理测定过程中所需要的仪器和试剂:紫外分光光度计、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.样品处理(可根据预实验结果适当调整样本量及比例)
①组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:(5-10)的比例(建议称取0.1g组织,加入1mL提取液)处理样品,冰浴匀浆,4℃g离心20min,取上清置于冰上待测。
②细菌或细胞:离心收集细菌或细胞到离心管内,按照细菌或细胞数量(10个):提取液体积(mL)为(-):1的比例(建议万细菌或细胞加入1mL提取液)处理样品,冰浴超声破碎(功率W,超声3s,间隔7s,总时间3min),4℃g离心20min,取上清置于冰上待测。
③血清(浆)、培养液等液体样本:直接检测或使用提取液适当稀释后再进行测定。
2.测定步骤
①分光光度计预热30min以上,调节波长至nm,蒸馏水调零。
②试验前将试剂一25℃预热30min以上。
吸光值测定:①加入试剂二即开始计时,测定30s(总时间)时nm处吸光值,记为A1测定和A1标准;②准确反应s后,测定s(总时间)时nm处吸光值,记为A2测定和A2标准;③计算A测定=A1测定-A2测定,A标准=A1标准-A2标准。
注意事项
①若同时测定多个样本,可根据样本量将试剂一与试剂二按照8:1的体积比配置为工作液使用(现用现配,严禁一次性全部配置储存使用),加样顺序为1mL石英比色皿中加入L工作液、L待测样本(或标准应用液),加入待测样本(或标准应用液)即开始计时;
②准确在30s和s处完成读数,以保证实验结果的准确性;
③若A1测定大于1.4,建议将待测样本使用提取液适当稀释后再进行测定,计算时相应修改;
④为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准),确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定,过程中问题请您及时与工作人员联系。
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