抗坏血酸（AsA）含量测定试剂盒（微量法）
产品货号：BA
产品规格：管/96样
产品简介：
AsA又称维生素c。AsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。
抗坏血酸氧化酶（AAO）催化AsA氧化生成DHA，通过测定AsA的氧化速率，即可计算出AsA含量。
产品内容：
溶液的配制：
1.试剂三：液体置于试剂瓶内EP管中。临用前根据用量按照试剂三:试剂二为1:的体积比例充分混匀，现用现配；
2.标准品：临用前配置，加入5.mL蒸馏水充分溶解，即10mmol/LAsA；吸取0.04mL上述溶液，加入0.96mL蒸馏水，混匀，即μmol/LAsA。
技术指标：
最低检出限：0.μmol/L
线性范围：6.25-1μmol/L
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
研钵/匀浆器、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可调式移液器、蒸馏水。
操作步骤：
1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。
2.细菌、细胞：按照细胞数量（个）：试剂一体积（mL）为~0：1的比例（建议万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；g，4℃离心20min，取上清液置冰上混匀待测。
3.血清等液体：直接测定。
二、测定操作：
1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到nm，蒸馏水调零。
2.试剂二在25℃水浴锅中预热30min以上。
3.标准管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL标准液、μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀后于nm测定，记录30s和s的吸光值A1和A2。ΔA标准管=A1-A2。
4.测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀后于nm测定，记录30s和s的吸光值A3和A4。ΔA测定管=A3-A4。
注意：如果样本数量较大。可将试剂二与试剂三按照8:1的体积比混匀配成工作液使用，根据样本所需现配现用，禁止一次性配完。加样顺序为μL工作液、20μL上清液（或标准液），加入上清液（或标准液）即开始计时。（标准管只需测定1-2次）。
三、AsA含量计算公式:
(1)按蛋白浓度计算
AsA(nmol/mgprot)=（C标准液×ΔA测定管÷ΔA标准管×V样）÷（Cpr×V样）
=×ΔA测定管÷ΔA标准管÷Cpr
(2)按样本质量计算
AsA(nmol/g质量)=（C标准液×ΔA测定管÷ΔA标准管×V样）÷(W×V样÷V样总)
=×ΔA测定管÷ΔA标准管÷W
(3)按细胞数量计算
AsA(nmol/cell)=（C标准液×ΔA测定管÷ΔA标准管×V样）÷(细胞数量×V样÷V样总)
=×ΔA测定管÷ΔA标准管÷细胞数量
(4)按液体体积计算
AsA(nmol/mL)=（C标准液×ΔA测定管÷ΔA标准管×V样）÷V样
=×ΔA测定管÷ΔA标准管
C标准液：标准液的浓度，μmol/L=nmol/mL；V样总：上清液总体积，1.0mL；V样：加入反应体系中上清液体积，0.02mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；细胞数量：以为单位计量，万。
注意事项：
1.试剂三和标准品现配现用，配制好的4℃保存，3天内使用完。
2.如果样本初始吸光值大于1.4，建议将样本用试剂一稀释后进行测定。