焦磷酸化酶（UGP）检测试剂盒（紫外分光光度法）
产品货号：BA
产品规格：50管/48样
产品简介：
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucosepyrophosphosphprylase，UGP，EC2.7.7.9）在自然界广泛分布。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖（UDPG），UDPG是高等植物和动物中主要活化酶的形式，作为葡萄糖基供体参与糖原、蔗糖、纤维素等的合成代谢。
UGP可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖，其在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH，UGP活性可以用nm的吸光值的变化来反应。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品内容：
溶液的配制：
1.试剂一：临用前加15mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，-20℃保存2周。
2.试剂二：临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后4℃保存，禁止反复冻融，4℃保存1周。
3.试剂三：临用前加1.4mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，-20℃保存2周。
4.试剂四：临用前每支加1mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，-20℃保存2周。
5.工作液的配制：将试剂一：试剂二：试剂三：试剂四：试剂五：试剂六按体积比=：：20：40：：混合，现用现配。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样品处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后00g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（个）：提取液体积（mL）为~0：1的比例（建议万细胞加入1mL提取液），冰浴超声破碎细胞（功率w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后00g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体：直接检测。
测定操作
1.紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
2.操作表：
三、UGP酶活计算
1.按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
UGP（U/mgprot）=[ΔA÷（ε×d）×V反总×]÷(V样×Cpr)÷T=.54×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
UGP（U/g质量）=[ΔA÷（ε×d）×V反总×]÷(W×V样÷V样总)÷T=.54×ΔA÷W
3.按照细胞数量计算
酶活单位定义：每个细胞每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
UGP（U/cell）=[ΔA÷（ε×d）×V反总×]÷(×V样÷V样总)÷T=0.×ΔA
4.按照液体体积计算
酶活单位定义：每毫升液体每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
UGP（U/mL）=[ΔA÷（ε×d）×V反总×]÷V样÷T=.54×ΔA
V反总：反应体系总体积，1×10-3L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；：细胞或细菌总数，万；：单位换算系数，1mol=nmol。
注意事项：
1.空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。
2.ΔA大于0.6或者A2测定大于1.2时，建议将样本稀释后再进行测定。当ΔA小于0.01时，可以延长反应时间（5min或10min）来测定。