黄嘌呤氧化酶（xanthioneoxidase,XOD）试剂盒说明书
微量法管/96样
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
XOD（EC1.17.3.2）催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心，肺，肝脏等组织中，当肝功能受损时，XOD大量释放到血清中，对肝损害的诊断具有特异性的意义。
测定原理：
XOD催化黄嘌呤产生尿酸，尿酸在nm下有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：30mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（个）：提取液体积（mL）为~0：1的比例（建议万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或W，超声3s，间隔10s，重复30次）；g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
操作步骤：
分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
XOD检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二中加入15mL试剂一，充分混匀，待用；现配现用；
测定前将XOD检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。
准备96孔UV板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于nm务必使用UV板）。
5、在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL样本和μL工作液，立即混匀并计时，记录nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。
XOD活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）XOD计算：
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生1nmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×]÷V样÷T=×ΔA
2、组织、细菌或细胞中XOD计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/mgprot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×]÷(V样×Cpr)÷T=×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/g鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×]÷（W×V样÷V样总）÷T=×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×]÷（×V样÷V样总）÷T=4.26×ΔA
V反总：反应体系总体积，2.6×10-4L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；：细胞或细菌总数，万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）XOD计算：
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生1nmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/mL）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×]÷V样÷T=×ΔA
2、组织、细菌或细胞中XOD计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/mgprot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×]÷(V样×Cpr)÷T=×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/g鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×]÷（W×V样÷V样总）÷T=×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（nmol/min/cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×]÷（×V样÷V样总）÷T=8.52×ΔA
V反总：反应体系总体积，2.6×10-4L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；：细胞或细菌总数，万。
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