总糖含量检测试剂盒(货号:AKSU)
糖类是自然界广泛分布的一类重要的有机化合物,是有机体的重要组成部分及能量来源,总糖是糖类的总称,包括具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和能够水解为还原性单糖的蔗糖、麦芽糖以及可部分水解的淀粉、纤维素和几丁质等。
总糖经酸水解将双糖彻底水解为具有自由醛基和酮基的还原糖,还原糖在碱性条件下能与DNS发生氧化还原反应,生成棕红色氨基化合物,产物在nm处具有特征吸收峰,通过吸光值的变化即可定量检测总糖的含量。
总糖检测原理测定过程中所需要的仪器和试剂:可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴和蒸馏水。
1.样本处理(可根据预实验结果适当调整样本量及比例)
①组织:称取约0.1g组织样本,加入1mL提取液A和1.5mL蒸馏水,研磨至匀浆,沸水浴处理30min(密封以防止水分散失)后冷却至室温,加入1mL提取液B,充分混匀后蒸馏水定容至10mL,取1mL提取后样本g常温离心10min,取上清液即为待测样本。
②血清(浆)、培养液等液体样本:取0.1mL液体样本,加入0.1mL提取液A和0.15mL蒸馏水,充分混匀,沸水浴处理30min(密封以防止水分散失)后冷却至室温,加入0.1mL提取液B,充分混匀后蒸馏水定容至1mL,g常温离心10min,取上清液即为待测样本。
2.测定步骤
①分光光度计预热30min以上,调节波长至nm,蒸馏水调零。
②在离心管中依次加入下列试剂:
吸光值测定:取1mL反应液至1mL玻璃比色皿中,测定nm处吸光值,记为A测定、A标准和A空白,计算A测定=A测定-A空白,A标准=A标准-A空白。注:空白管只需测定1-2次。
标准曲线的建立:以1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mg/mL标准稀释液浓度为横坐标(x),以其对应的A标准为纵坐标(y),绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将A测定带入公式得到x(mg/mL)。
注意事项
①若吸光值超出标准线性吸光值范围,建议适当增加样本(低于最低值)或将待测样本适当稀释(高于最高值)后再进行测定,计算时相应修改;
②本产品对于纤维素的分解程度无法达到%;
③为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准),确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定,过程中问题请您及时与工作人员联系。
ForResearchUseOnly.NotforUseinDiagnosticProcedures.