己糖激酶活性检测试剂盒（货号：AKSU）
己糖激酶（Hexokinase）广泛存在于动植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径中控制葡萄糖代谢速率的第一个关键酶，可催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖，在机体代谢过程中发挥着重要作用。
己糖激酶可催化葡萄糖和ATP生成葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）和ADP，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）可催化葡萄糖-6-磷酸脱氢生成6-磷酸葡萄糖酸（6-PGA），同时使NADP+还原成NADPH，NADPH在nm处具有特征吸收峰，通过吸光值变化即可表征己糖激酶的活性。
己糖激酶检测原理测定过程中所需要的仪器和试剂：紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿（光径=1cm）/96孔UV板、研钵/匀浆器、可调式移液器/多道移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.粗酶液的制备（可根据预实验结果适当调整样本量和比例）
①细菌或细胞：离心收集细菌或细胞至离心管内，按照细菌或细胞数量（10个）：提取液体积（mL）为（-）：1的比例（建议万细菌或细胞加入1mL提取液）处理样品，冰浴超声破碎（功率20%或W，超声3s，间隔10s，重复30次），4℃g离心10min，取上清置于冰上待测。
②组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：（5-10）的比例（建议称取0.1g组织，加入1mL提取液）处理样品，冰浴匀浆，4℃g离心10min，取上清置于冰上待测。
③血清（浆）、培养液等液体样本：直接检测或适当稀释后再进行检测。
2.测定步骤
①紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
②试验前将试剂三恢复至室温后置于37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）预热10min。
③在微量石英比色皿或96孔UV板中依次加入下列试剂：
吸光值测定：①立即充分混匀并开始计时，测定20s（总时间）时nm处吸光值，记为A1；②37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确反应s，测定s（总时间）时nm处吸光值，记为A2；③计算ΔA=A2-A1。
注意事项
①测定过程中粗酶液和HK工作液需置于冰上保存以免失活；
②准确在相应时间点完成测定，若使用96孔UV板进行测定，建议使用多道移液器且分批进行测定，以保证组间反应时间统一；
③若ΔA0.5建议将粗酶液使用提取液适当稀释或缩短反应时间至2min后再进行测定，使ΔA0.5以提高检测灵敏度，计算时相应修改；
④为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。
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