高铁还原酶（ferric-chelatereductase,FCR）试剂盒说明书
微量法管/96样
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
高铁还原酶（ferric-chelatereductase,FCR）催化高价铁螯合物中的Fe3+还原为Fe2+，在部分物种铁元素的吸收中有重要作用。
测定原理：
FCR催化Fe3+还原为Fe2+，Fe2+和ferrozine反应显色，在nm下有特征吸光值。
自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体6mL×1瓶，4℃避光保存;
试剂二：液体6mL×1瓶，4℃避光保存;
试剂三：液体6mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：水（mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水），进行冰浴匀浆。00g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
2、工作液配制：将试剂一、二、三以1:1:1的比例混合。临用前配制，用多少配多少。
3、在微量石英比色皿/96孔板中，加入50μL样本上清和μL工作液，混匀，记录初始吸光值A1和30min后的吸光值A2。ΔA=A2-A1。
FCR活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=8.x+0.，R2=0.；
（1）按样本质量计算
单位定义：每g样本每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位。
FCR（nmol/min/g鲜重）=（△A-0.）÷8.×0×V标÷(V样÷V样总×W)÷T
=4.×（△A-0.）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg蛋白每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位。
FCR（nmol/min/mgprot）=（△A-0.）÷8.×0×V标÷(V样÷V样总×Cpr)÷T
=4.×（△A-0.）÷Cpr
V样总：加入提取液体积，1mL；V样：反应中样品体积，50μL；V标：加入标准品体积，50μL；T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；0，μmol到nmol的转换系数。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=4.x+0.，R2=0.；y，吸光度
（1）按样本质量计算
单位定义：每g样本每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位。
FCR（nmol/min/g鲜重）=（△A-0.）÷4.×0×V标÷(V样÷V样总×W)÷T
=8.×（△A-0.）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg蛋白每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位。
FCR（nmol/min/mgprot）=（△A-0.）÷4.×0×V标÷(V样÷V样总×W)÷T
=8.×（△A-0.）÷Cpr
V样总：加入提取液体积，1mL；V样：反应中样品体积，50μL；V标：加入标准品体积，50μL；T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；0，μmol到nmo
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