植物中脂氧合酶LOX活性检测试剂盒

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植物中脂氧合酶(LOX)活性检测试剂盒(货号:AKPL)

一、产品描述

脂氧合酶(LOX)是一种广泛存在于植物体中含非血红素铁的氧化还原酶,作为植物十八碳酸代谢途径的关键酶,能够专一性催化多元不饱和脂肪酸的加氧反应,生成具有共轭双键的过氧化氢物,直接或间接参与植物的生长、发育、成熟和衰老的调控过程,对植物的生长发育及对环境胁迫的反应具有重要的影响。

脂氧合酶能够催化亚油酸氧化,产物在nm处具有特征吸收峰,通过吸光值的变化速率即可表征脂氧合酶的活性。

植物中脂氧合酶活性检测原理

二、产品内容

注:试剂二瓶内含棕色离心管,取适当试剂一(总量6mL)将固体充分溶解后洗入棕色瓶中即可。

三、产品使用说明

1.植物中脂氧合酶(LOX)提取(可根据预实验结果适当调整样本量)

按照样本质量(g):提取液体积(mL)为1:(5-10)的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)处理样品,冰浴研磨至匀浆(或将样本使用液氮研磨后加入提取液混合均匀),4℃g离心20min,取上清置于冰上待测。

2.测定步骤

①紫外分光光度计预热30min以上,调节波长至nm,蒸馏水调零。

②使用前将试剂一25℃预热30min以上。

③在1mL石英比色皿中依次加入下列试剂:

吸光值测定:①迅速混匀并开始计时,测定15s时nm处吸光值,记为A1测定和A1空白;②测定75s时nm处吸光值,记为A2测定和A2空白;③计算A测定=A2测定-A1测定,A空白=A2空白-A1空白,A=A测定-A空白。注:空白管只需测定1-2次。

四、注意事项

①样品处理和测定等过程均需在冰上进行以免失活,样品制备后需当日完成测定;

②本方法采用速率法测定酶活,准确在15s和75s处完成读数,以保证实验结果的准确性;

③若A2测定大于2.5或A大于1.2,建议将提取液使用试剂一稀释后再进行测定;

④为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准),确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定,过程中问题请您及时与工作人员联系。

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