支链淀粉含量试剂盒说明书
微量法管/96样
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
支链淀粉是具有高度分支的多糖,淀粉中直链淀粉和支链淀粉的比例和含量对淀粉产品的加工、物化特性、糊化温度等有着直接的影响,对于不同比例直、支链淀粉的淀粉的研究具有重要的意义。
测定原理:
利用80%乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开,利用双波长比色法测定支链淀粉含量。
需自备的仪器和用品:
酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰、乙醚和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体mL×1瓶;4℃保存;
试剂二:乙醚mL×1瓶;4℃保存;(自备)
试剂三:液体mL×1瓶;4℃保存;
试剂四:液体2mL×1瓶;4℃保存;
试剂五:液体uL×1瓶;4℃保存;
淀粉提取:
称取0.01~0.02g烘干样本(建议称取约0.01g)于研钵中研碎,加入1mL试剂一,充分匀浆后转移到EP管中,80℃水浴提取30min,0g,25℃离心5min,弃上清,留沉淀,加入1mL试剂二(乙醚)振荡5min,0g,25℃离心5min,弃上清,留沉淀,加入1mL试剂三充分溶解,90℃水浴10min,冷却后待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,蒸馏水调零。
测定管:在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20uL样本,14uL试剂四,uL蒸馏水,2uL试剂五,44uL蒸馏水,混匀,分别测定和nm处吸光值,ΔA测定=A-A。
空白管:在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20uL试剂三,14uL试剂四,uL蒸馏水,2uL试剂五,44uL蒸馏水,混匀,分别测定和nm处吸光值,ΔA空白=A-A。
支链淀粉含量计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y=0.x+0.;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
1、按照蛋白浓度计算
支链淀粉含量(mg/mgprot)=[(ΔA测定-ΔA空白-0.)×V1]÷0.÷(V1×Cpr)=8.24×(ΔA测定-ΔA空白-0.)÷Cpr
2、按样本干重计算
支链淀粉含量(mg/g干重)=[(ΔA测定-ΔA空白-0.)×V1]÷0.÷(W×V1÷V2)=8.24×(ΔA测定-ΔA空白-0.)÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y=0.x+0.;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
1、按照蛋白浓度计算
支链淀粉含量(mg/mgprot)=[(ΔA测定-ΔA空白-0.)×V1]÷0.÷(V1×Cpr)=16.47×(ΔA测定-ΔA空白-0.)÷Cpr
2、按样本干重计算
支链淀粉含量(mg/g干重)=[(ΔA测定-ΔA空白-0.)×V1]÷0.÷(W×V1÷V2)=16.47×(ΔA测定-ΔA空白-0.)÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
最低检测限为10mg/g干重或0.1mg/mgprot。