资料13与功能主治有关的主要药效试验资料及文献资料
天智颗粒对大、小鼠学习记忆获得的影响(实验一)
材料和方法
药品：天智颗粒，由中药研究所剂型室提供，脑复康(Acetamidepyrrolidone，北京第三制药厂，批号：)均配成20%的浓度备用；氢溴酸东莨菪碱(ScopolaminSP，西德E.Merck公司，批号:)配成0.02%的浓度备用。
动物：选用SD雄性大鼠，体重±8g，由军事医学科学院动物中心提供(合格证号R10)。ddy小鼠，均为雄性，体重33±1g，由卫生部生物制品所实验动物中心提供，(合格证号M23)。
仪器：用自制获国家专利局证书的多用光控被动逃避反射仪进行实验，大鼠用方波刺激输出为V(p-p)，波宽ms，周期为ms，使用箱体为55×15×16cm。小鼠用方波输出为85V(P-P)，所用箱体为30×8.5×10cm。
方法：明暗室法[1-2]：将大鼠按体重分为对照、模型(NS＋SP)、天智颗粒小、中、大三个剂量(3.9，7.7，15.4g/kg，合生药量)及脑复康小、中、大三个剂量(0.5，1.0，2.0g/kg)组，共八组。各给药组每天ig1.0ml/g体重；天智颗粒分别为临床用药的2.3～9.0倍，除NS＋SP组为16只动物外，其余各组均为12只。于训练前7d给各组动物ig天智颗粒及脑复康，对照组ig等体积蒸馏水。于第7d给药1小时后，除对照组scNS外其余各组均scSP(2mg/kg)，注射10min后进行第一次训练，间隔45min后再进行第二次训练(此时SP的血药浓度最高，作用最强)[3]。尔后再进行第三次训练。(根据预实验结果表明NS对照组动物一日内经过三次训练记忆获得率平均可达90%以上)。以在明室潜伏期达秒为求出记忆获得率。
小鼠的记忆获得实验基本与大鼠的实验方法相同，但分为对照，NS+SP，天智颗粒大、小剂量(23.0，7.7g/kg，分别为临床用量的13.8及4.6倍)及脑复康(1.0g/kg)组,共五组。各给药组每天ig0.2ml/10g，连续7d；于第7d给药1h后，除对照组s.cNS外其余各组均scSP(2mg/kg)，记忆获得及再现率组间比较用PQ检验[4]。
结果:
大鼠的实验结果：scSP后，各组进行第一次训练：记忆获得率平均为5.4±1.3，各组间比较没有显著性差异(均P0.05)。第二次训练：NS组、天智颗粒大、中、小剂量均＋SP各组的获得率分别与NS＋SP组比较虽未见有显著性差异(均P0.05)；但有增加记忆获得率的趋势。第三次训练：NS组的记忆获得率为91.6±12.8％，NS＋SP组为44.1±24.5％，两组间比较有显著性差异(P0.05)；天智颗粒大、中、剂量组的获得率分别与NS＋SP组比较均有显著性差异(P均0.05)，小剂量组虽未见显著性差异，但也有提高记忆获得率的趋势,而脑复康中剂量组与NS＋SP组比较也有显著性差异(P0.05)，结果见表1。
小鼠的实验结果：各组在第一次训练时，各组间获得率未见显著性差异(均P0.05)，在进行第二次训练时NS组记忆获得率与NS＋SP组比较，两组间组有非常显著性差异(P0.01)，说明SP组造型成功。天智颗粒大、中剂量组记忆获得率分别与NS＋SP组比较有显著性差异(均P0.05)，脑复康组获得率与NS＋SP组比较也有显著性差异(P0.05)，第三次训练时，给药组各组与NS＋SP组比较未有显著性差异(均P0.05)，结果见表2。SP为M—胆碱神经能拮抗剂，因此它有阻断脑内胆碱能的功能，可明显抑制学习和记忆的获得[2]。天智颗粒能翻转SP引起大、小鼠记忆获得损害，其作用机理可能是作用于胆碱能神经系统，具体作用环节尚不清楚，有待进一步研究。
天智颗粒翻转SP及乙醇引起小鼠记忆保持损害(实验二)
材料及方法
药品：天智颗粒，中药研究所剂型室提供，配成15%的浓度备用；脑复康(北京第三制药厂，批号)配成20%的浓度备用，氢溴酸东莨菪碱(SP，西德E.MercK公司，批号)配成0.02%的浓度备用。氢溴酸东莨菪碱，脑复康均与前文相同。95%乙醇(北京化工厂，批号)配成35%的浓度备用。
动物：ddy小鼠，均为雄性，体重32±2g，由卫生部生物制品所实验动物中心提供，(合格证号M23)。
方法：跳台实验法[2，5]
⑴翻转SP引起小鼠记忆保持损害：
于被动回避装置训练前7d，ig天智颗粒(3.9，7.7，23.0g/kg)，脑复康(0.5g/kg)，对照组ig等体积蒸馏水(0.2ml/10g体重)。于第7d给药1h后，先将小鼠放入箱内使其熟悉环境5min，然后轻放于平台上，记录小鼠在台上停留的潜伏期(SDL)，待小鼠从台上跳下四肢均接触铜棒时，立即给予刺激，直至小鼠跳回平台上，记录小鼠从台上跳下受电刺激后逃回至台上的潜伏期(EL)。选取SDL和EL在3~60s的小鼠，24小时后用于记忆保持实验训练后的小鼠按SDL和EL进行分组，各组小鼠(15只)的SDL和EL值(均P0.05)，记忆保持24h后，小鼠在平台上停留3min仍未跳下者剔除，训练前30min除对照组(s.cNS)外，其余各组均(s.cSP2mg/kg)。
⑵翻转乙醇引起小鼠记忆保持损害：
于训练前7d，ig天智颗粒(3.9，5.8，11.5g/kg)，脑复康1.0g/kg，对照组ig等体积蒸馏水(0.2ml/10g体重)，动物处置及训练同上，24h后用于记忆保持实验训练后的小鼠按SDL和EL进行分组，各组小鼠(15只)之间的SDL和EL值(均P0.05)，见表4；于记忆保持训练前20min用35%乙醇0.1ml/10gig。
结果及讨论
⑴翻转SP引起小鼠记忆保持损害实验结果：
实验各组的SDL和EL于SP处理前未见显著性差异(均P0.05)，见表3括弧内数值。NS＋SP组的SDL:NS+SP组最短,为57±34s,与NS组比较有非常显著性差异(P0.01)，而EL最长与NS组比较也有非常显著的差异(P0.01)，天智颗粒大、中剂量组的SDL分别分别与NS＋SP组比较有非常显著(P0.01);EL:大、中剂量组分别与NS＋SP组比较也有显著性或非常显著性差异(P0.01或0.05)。表明天智颗粒大、中剂量能明显延长SDL，缩短EL。而天智颗粒小剂量对SDL有延长趋势，但统计学检验未见有显著性差异，脑复康有延长SDL的作用,见表3。
小结：SP对记忆巩固及再现的作用说法不一，有的学者认为SP能造成短时记忆保持损害[6]天智颗粒大、中剂量能显著翻转SP引起小鼠记忆保持损害。
⑵翻转乙醇引起小鼠记忆保持损害结果：
实验各组的SLD和EL于乙醇处理前未见显著性差异，见表4括弧内数值。24小时后，给动物ig35%乙醇，20min后动物开始兴奋，有的步态蹒跚，以后逐渐安静。SDL:天智颗粒大、中、小剂量对小鼠SDL均有明显影响，分别与NS＋乙醇组比较，均有显著性差异(均P0.01或0.05)。EL：天智颗粒大、中、小剂量对小鼠EL分别与NS+乙醇组比较均有显著性差异(均P0.01或0.05)，结果见表4。
由上可知，乙醇在较低浓度下可明显破坏记忆获得及再现过程，而对一般运动无明显影响，但它在机体内引起学习记忆障碍的机制也较复杂[2]，因此天智颗粒翻转乙醇引起记忆再现损害的作用途径及机理也是复杂的。其原因可能是多方面的，对此有待进一步探讨。
小结：天智颗粒能翻转乙醇引起小鼠记忆保持损害。
天智颗粒对家兔脑血流及血压的影响(实验三)
天智颗粒系天麻钩藤饮加味而成，因此研究它促智作用的同时必须研究对脑血流的影响。
材料和方法
药品：天智颗粒，由中药研究所剂型室提供，配成37.5%的浓度备用；脑复康(北京第三制药厂，批号)配成25%的浓度备用。
动物：15只健康家兔，均为雄性，体重3.10.2kg。
仪器：多导生理记录仪(日本光电RM-)；电磁流量计(日本光电MFV-)；计算机(美国APPLEⅡ)。
方法：将动物分为天智颗粒大(11.5g/Kg)，中(5.8g/Kg)、小(2.9g/Kg)剂量和脑复康大(1.0g/Kg)、中(0.5g/Kg)、小(0.25g/Kg)剂量组，共6组，每组5只。给药量4.0ml/kg，戊巴比妥钠30mg/Kg，ip麻醉。分离左侧颈总动脉，插管连至MPU-0.5A型压力换能器及AP-G型载波放大器描记血压，用ED-型微分器将血压波微分后触发AT-G型心率计描记心率。分离出右侧颈总动脉，结扎颈外动脉，分离出左侧股动脉，分别以MFV-型电磁流量计探头卡住右颈总和股动脉，描记颈动脉血流量，以颈内动脉血流量代表脑血流量(CBF)及股动脉血流(FBF)代表外周血流量。血压，心率(HR)、血流量均用日本光电RM-型多导仪描记，同时用《实验动物血流动力信号微机实时分析系统》微机系统[7]从多导仪的输出口对上述变量采样，进行实时分析，计算血流动力学参数。术后稳定30min后，由十二指肠给药，药前对各参数采样5min，所获得数值均数作为对照值，给药后连续采样60min或min。除HR外的5项变量收缩压(SBP)，舒张压(DBP)，平均动脉压(MBP)，CBF和FBF均以每min的相对值对时间积分计算出曲线下的面积(AUC)；分6～60，61～min二个时间区计算CBF和FBF变化；每个剂量组CBF、FBF变化参数与药前进行比较，统计处理用t检验。
结果及讨论
⑴对AUCof(SBP-t、DBP-t、MBP-t)的影响：天智颗粒大、中、小三个剂量组给药后6-min对AUCof(SBP-t、DBP-t、MBP-t)均未见有显著影响。
⑵对CBF的影响：从表5可见药后60min、min，大、中剂量组均有增加CBF的作用，经t检验处理均显著高于药前(均P0.05)；小剂量未见对CBF有影响。脑复康大剂量给药30min后均显示有增加脑血流量的作用，分别与对照组比较有显著性差异(均P0.05)。
⑶对FBF的影响：天智颗粒大剂量于给药20min后均可使FBF显著增高，与药前比较均有显著差异(均P0.05)，而脑复康大、中、小剂量均FBF有增加的作用。
⑷对HR的影响：天智颗粒三个剂量组对HR没有显著的影响。天智颗粒大，中剂量组能增加麻醉动物的CBF，这提示天智颗粒有增加心输出量的作用，因此导致CBF增加，其结果是能量代谢物及氧供应增加，从而有利于因损伤脑细胞功能的恢复。文献也报告天麻能增加CBF，是由于天麻能增加心输出量所致[8,9]，脑复康也有增加脑血流量的作用，与文献报告一致[10]。
小结：天智颗粒大，中剂量能增加麻醉家兔CBF，大剂量能使FBF增加。
天智颗粒对小鼠脑缺血的影响(实验五)
材料及方法
药品：天智颗粒，由中国中医研究院中药研究所剂型室提供，脑复康同前文。
动物：ddy小鼠，均为♂性，提供单位同上。
方法：[11]
选用体重27～35g小白鼠只，天智颗粒分大、中、小(23.0，5.8，2.9g/kg)三个剂量，脑复康(1.0g/kg)及对照共五组，于断头前7天ig各药，对照组给等体积蒸馏水。于ig第7天1h后，用大剪刀在小鼠耳后快速断头，用盲法(即断头记录时间者不知道动物分组)记录头部喘息时间，各组动物喘息时间比较用t检验。
结果：
从表6可见，对照组的喘息时间平均为19.0±3.0s，天智颗粒大、中剂量组喘息时间分别与对照组比较有显著性差异(P0.05)，表明大、中剂量可明显延长断头小鼠喘息时间的作用。天智颗粒小剂量组与对照组比较未见显著性差异(均P0.05)，见表6。
由上可知，天智颗粒中剂量组有明显延长小鼠断头喘息时间的作用，提示天智颗粒中剂量可使脑耗能量减少，从而起到保护脑的作用。
天智颗粒对大白鼠肝、脑、心、肾匀浆过氧化脂质(Lpo)和SOD含量的影响(实验六)
药物：天智颗粒，由中国中医研究院中药研究所剂型室提供。配成13%和17%的浓度备用；维生素E(VitaminE系北京第二制药厂产品(批号：)，配成3.3%及0.25%的浓度备用；硫代巴比妥酸(Thibarbituricacid生化实剂，批号：，上海实剂二厂)；三氯醋酸(日本和光株式会社产品，批号：)；四乙氧基丙烷(1，1，3，3-Tetraaethoxypropan瑞典Fluka公司，批号)，SOD试剂盒为南京金盾生化试剂厂生产，批号：。
动物：Wistar大白鼠，35只，雌雄不拘，体重～g。由本院动物房提供。
方法及结果：
对大白鼠肝、心、脑、肾匀浆Lpo生成的影响：将动物分为5组，每组7只。每天ig1次大(19.5g/kg)、中(9.8g/kg)及小剂量(4.9g/kg)各0.15ml/10g.d的天智颗粒以及0.1ml/10g.d体重的维生素E组(25mg/kg)，对照组ig蒸馏水0.15ml/10g.d，连续15d，于第15d断头处死动物，取肝、心、脑、肾，制成5%肝、肾及10%脑匀浆生理盐水(NS)溶液及5%心Ringer匀浆液。取离心管，分别加入肝、脑、心、肾匀浆各1.5ml，依文献方法用型分光光度计在nm波长下比色测定，以四乙氧基丙烷为标准，计算每克组织Lpo的生成量，结果见表7。由表7可见天智颗粒大、中、小剂量组能非常显著抑制大白鼠肝匀浆Lpo的生成(P均0.01)。大、中剂量还可抑制心肌匀浆Lpo生成，同时，大剂量能非常显著抑制脑过氧化脂质生成，与对照组比较有非常显著差异(均P0.01)。天智颗粒中、小剂量组能非常显著提高大鼠血清SOD水平，见表8。
小结：实验证明天智颗粒能显著抑制大鼠肝、心、脑组织Lpo的生成；提高血清SOD水平。
总结：通过天智颗粒翻转SP及乙醇所致大、小鼠记忆获得及再现作用，证明该方具有治疗中医所述的“健忘”作用，祖国医学文献中早已认识到健忘与精神行为改变有密切关连;天智颗粒文献报告有增加心输出量的作用，我们的研究表明它有增加CBF及FBF的作用，证明该方治疗老年呆病的作用机理可能与改善脑循环有关。另外该方还可延缓小鼠断头的喘息时间，降低脑组织Lpo的生成等，所有这些均可说明该方剂翻转SP及乙醇所致动物的学习记忆障碍是通过多种途径实现的。
参考文献
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