Boxbio】葡萄糖含量检测试剂盒(货号:AKSU)
葡萄糖是自然界分布最广泛的单糖,不仅是细胞能量代谢的主要底物,其代谢中间产物也是生物合成的重要底物,在生物学领域具有重要地位,在食品工业和医药等领域具有广泛应用。
葡萄糖氧化酶(GlucoseOxidase,GOD)催化葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放HO;过氧化物酶(Peroxidase,POD)催化HO氧化4-氨基安替比林偶联酚,生成红色醌类化合物,产物在nm处具有特征吸收峰,通过吸光值变化即可定量检测葡萄糖的含量。
葡萄糖检测原理测定过程中所需要的仪器和试剂:可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.样本处理(可根据预实验结果适当调整样本量及比例)
①组织:按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:(5-10)的比例(建议称取0.1g组织,加入1mL蒸馏水)处理样品,研磨至匀浆,95℃水浴10min(密封以防止水分散失),冷却至室温,g常温离心10min,取上清液href=""即为待测样本。
②细菌或细胞:离心收集细菌或细胞至离心管内,按照细菌或细胞数量(10个):蒸馏水体积(mL)为(-):1的比例(建议万细菌或细胞加入1mL蒸馏水)处理样品,冰浴超声破碎细菌或细胞(功率20%或W,超声3s,间隔10s,重复30次),95℃水浴10min(密封以防止水分散失),冷却至室温,g常温离心10min,取上清液即为待测样本。
③液体样本:直接检测或使用蒸馏水适当稀释后再进行检测。
2.测定步骤
①分光光度计预热30min以上,调节波长至nm,蒸馏水调零。
②混合工作液的制备(现配现用):根据使用量按照试剂一:试剂二=1:1的体积比配置。
③在离心管中依次加入下列试剂:
吸光值测定:将反应液置于1mL玻璃比色皿中,测定nm处吸光值,记为A测定、A标准和A空白;计算A测定=A测定-A空白,A标准=A标准-A空白。注:空白管只需测定1-2次。
标准曲线的建立:以0.4、0.3、0.2、0.1、0.05、0.mg/mL标准稀释液浓度为横坐标(x),以其对应的A标准为纵坐标(y),绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将A测定带入公式中得到x(mg/mL)。
四、注意事项
①试剂一和试剂二避免与皮肤接触,若不慎溢出请用大量水冲洗被污染的部位;
②若测定吸光值超出标准吸光值线性范围:建议适当增加样本量或将样品使用蒸馏水稀释后再进行测定,计算时相应修改即可;
③为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准),确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定,过程中问题请您及时与工作人员联系。
ForResearchUseOnly.NotforUseinDiagnosticProcedures.