酪氨酸解氨酶（TAL）活性检测试剂盒（微量法）
产品货号：BA
产品规格：管/96样
产品简介：
酪氨酸解氨酶（TAL）广泛存在于植物和微生物中，是苯丙氨酸次生代谢途径的关键酶之一。TAL能够跃过肉桂酸-4-羟基化酶（C4H）直接将酪氨酸转化为香豆酸，香豆酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。
TAL能够分解酪氨酸产生香豆酸，其在nm下有吸收峰，根据吸光度的变化率可计算出TAL活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成：
溶液的配制：
试剂二：临用前取1瓶加入2.8mL蒸馏水和11μL浓HCl充分溶解待用。现配现用。2-8℃保存4周。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、细胞超声破碎仪、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰、浓盐酸和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可参考文献）
1.组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照每万细胞或细菌加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率w，超声3s，间隔10s，重复30次）。g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至nm，紫外分光光度计蒸馏水调零。
2.加样表（在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入）
将上述试剂分别加入微量石英比色皿/96孔UV板后迅速吹打混匀，记录第10s的吸光值A1，迅速置于37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴或培养箱中3min，拿出迅速擦干测定3min10s时的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
三、TAL酶活计算
A、按微量石英比色皿计算：
1.按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟在nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活性单位。
TAL（U/mgprot）=ΔA÷0.01×V反总÷(V样×Cpr)÷T=×ΔA÷Cpr
2.按样本质量计算：
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟在nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活性单位。
TAL（U/g质量）=ΔA÷0.01×V反总÷(W÷V提取×V样)÷T=×ΔA÷W
3.按细胞或细菌数量计算：
单位的定义：每个细胞或细菌在反应体系中每分钟在nm下吸光度变化0.01定义为一个酶活性单位。
TAL（U/cell）=ΔA÷0.01×V反总÷(÷V提取×V样)÷T=0.×ΔA
V反总：反应总体积，0.2mL；V样：加入的样本体积，0.02mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V提取：提取液体积，1mL；：万个细胞；T：反应时间，3min。
B、按96孔UV板计算：
1.按蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟在nm下吸光值变化0.定义为一个酶活性单位。
TAL（U/mgprot）=ΔA÷0.×V反总÷(V样×Cpr)÷T=×ΔA÷Cpr
2.按样本质量计算：
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟在nm下吸光值变化0.定义为一个酶活性单位。
TAL（U/g质量）=ΔA÷0.×V反总÷(W÷V提取×V样)÷T=×ΔA÷W
3.按细胞或细菌个数计算：
单位的定义：每个细胞或细菌在反应体系中每分钟在nm下吸光度变化0.定义为一个酶活性单位。
TAL（U/cell）=ΔA÷0.×V反总÷(÷V提取×V样)÷T=1.×ΔA
V反总：反应总体积，0.2mL；V样：加入的样本体积，0.02mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V提取：提取液体积，1mL；：万个细胞；T：反应时间，3min。
注意事项：
当ΔA大于0.2或者A1大于1.5时，建议将样本用蒸馏水稀释后测量；ΔA过小时，建议增加酶促反应时间（5min或10min）或增加加入的样本体积来测定。计算时注意同步修改计算公式。（计算时注意同步修改计算公式）。
实验实例：
1.取0.1g木槿叶加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清稀释3倍后按照测定步骤操作，使用微量石英比色皿测得计算ΔA=A2-A1=0.-0.=0.，按样本质量计算酶活得：
TAL（U/g质量）=×ΔA÷W×F（稀释倍数）=×0.÷0.1×3=.U/g质量。