过氧化氢酶活性检测试剂盒（货号：AKAO）
过氧化氢酶（CAT）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物演化过程中建立起来的生物防御系统关键酶，其主要功能是催化生物体内的HO分解，使机体免受自由基损伤，在活性氧清除系统中具有重要作用。
HO在nm处具有特征吸收峰，过氧化氢酶能够分解HO，使反应溶液nm处吸光值随反应时间而下降，根据吸光值的变化率即可表征过氧化氢酶的活性。
过氧化氢酶检测原理CAT检测工作液的配置：使用前取30μL试剂二加入20mL试剂一（或按比例配置），充分混匀，即为检测工作液，或按比例配置，配置后4℃可保存一周。
测定过程中所需要的仪器和试剂：紫外分光光度计、1mL石英比色皿（光径10mm）、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.粗酶液的制备（可根据预实验结果适当调整样本量及比例）
①细菌或细胞：离心收集细菌或细胞到离心管内，按照细菌或细胞数量（10个）：提取液体积（mL）为（-）：1的比例（建议万细菌或细胞加入1mL提取液）处理样品，冰浴超声破碎（功率20％或W，超声3s，间隔10s，重复30次），4℃g离心10min，取上清置冰上待测。
②组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：（5-10）的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）处理样品，冰浴匀浆，4℃g离心10min，取上清置冰上待测。
③血清（浆）、培养液等液体样本：直接检测或适当稀释后再进行检测。
2.测定步骤
①紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
②测定前将CAT检测工作液置于37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）预热10min。
③在1mL石英比色皿中依次加入下列试剂：
吸光值测定：充分混匀并立即开始计时，立即测定nm处5s时吸光值A1和65s时吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
注意事项
①反应过程气泡过多表明酶活性过高，结果可能为负值，建议将粗酶液使用提取液适当稀释后再进行测定；若稀释样本或反应体系没有产生气泡仍然出现较小的负值，说明该样本测不到CAT活性；
②若吸光值超过3，请检查比色皿是否为石英比色皿；
③若ΔA大于0.2建议将粗酶液使用提取液适当稀释后再进行测定，控制ΔA小于0.2能够确保反应过程曲线呈良好线性，以提高检测准确性和灵敏度；
④为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。
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