实验原理
测蛋白质含量的原理
由于蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,因此蛋白质有吸收紫外线的性质,吸收高峰在nm波长处。在此波长范围内,蛋白质溶液的光吸收值(A)与其含量成正比关系,可用作定量测定。
测核酸含量的原理
核酸及其衍生物,核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性质,其吸收高峰在nm波长处。DNA浓度(ug/ml)=A/0./L*稀释倍数(L为比色池厚度1cm)
仪器及试剂
美析UL-超微量紫外可见分光光度计
标准蛋白溶液。结晶牛血清蛋白,预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量,根据其纯度配制成1mg/ml蛋白溶液。
待测蛋白溶液
核酸溶液
操作步骤
绘制标准曲线
按下表分别向每支试管加入各种试剂,摇匀。选用光程为1cm的石英比色杯,在nm波长处分别测定各管溶液的0A值。以A值为纵坐标,蛋白质浓度为横坐标,绘制标准曲线。
样品测定
取待测蛋白质溶液1ml,加入蒸馏水3ml,摇匀,按上述方法在nm波长处测定光吸收值,并从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。
取待测核酸溶液1ml,加入蒸馏水3ml,测定核酸的浓度。
实验结果
测得的八个试管中溶液的A值如图所示
蛋白质样品的A值为0.
核酸样品的A值为0.
蛋白质含量
根据方程当A=0.时,0.0=0.c+0..
C=0.mg/ml.
因为溶液稀释了4倍,所以样品蛋白的浓度为
0.*4=0.mg/ml
核酸含量
DNA浓度=A/0./L*稀释倍数
=0./0./1*4
=7.8ug/ml