测定蛋白核酸含量的应用方案超微量紫外可

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实验原理

测蛋白质含量的原理

由于蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,因此蛋白质有吸收紫外线的性质,吸收高峰在nm波长处。在此波长范围内,蛋白质溶液的光吸收值(A)与其含量成正比关系,可用作定量测定。

测核酸含量的原理

核酸及其衍生物,核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性质,其吸收高峰在nm波长处。DNA浓度(ug/ml)=A/0./L*稀释倍数(L为比色池厚度1cm)

仪器及试剂

美析UL-超微量紫外可见分光光度计

标准蛋白溶液。结晶牛血清蛋白,预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量,根据其纯度配制成1mg/ml蛋白溶液。

待测蛋白溶液

核酸溶液

操作步骤

绘制标准曲线

按下表分别向每支试管加入各种试剂,摇匀。选用光程为1cm的石英比色杯,在nm波长处分别测定各管溶液的0A值。以A值为纵坐标,蛋白质浓度为横坐标,绘制标准曲线。

样品测定

取待测蛋白质溶液1ml,加入蒸馏水3ml,摇匀,按上述方法在nm波长处测定光吸收值,并从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。

取待测核酸溶液1ml,加入蒸馏水3ml,测定核酸的浓度。

实验结果

测得的八个试管中溶液的A值如图所示

蛋白质样品的A值为0.

核酸样品的A值为0.

蛋白质含量

根据方程当A=0.时,0.0=0.c+0..

C=0.mg/ml.

因为溶液稀释了4倍,所以样品蛋白的浓度为

0.*4=0.mg/ml

核酸含量

DNA浓度=A/0./L*稀释倍数

=0./0./1*4

=7.8ug/ml




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