磷是植物必需大量元素。植物主要通过根系从土壤中获取磷元素。土壤磷包括有机磷和无机磷。土壤有机磷经过矿化分解而转化为无机磷,才能进一步被植物吸收利用。测定原理:从土壤中提取无机磷,在酸性环境中,通过钼蓝法定磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法,一定条件下,钼蓝与磷酸根生成nm有特征吸收峰的物质,通过测定nm光吸收,即可计算出无机磷含量。
需自备的试剂和器材:
1.可见分光光度计/酶标仪
2.37℃恒温箱
3.系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
4.去离子水或蒸馏水
产品组成:
实验步骤:
一、无机磷提取(具体比例可以参考文献)
称取约0.1g组织,加试剂一1.0mL冰上充分匀浆,4℃,rpm,离心10min,取上清液,待测。
二、试剂准备
溶液的配制:
1、试剂R3:临用前配制,加入10mL蒸馏水,充分溶解后加入5mL试剂R2,混匀;
2、标准品:1mmol/L无机磷标准液。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
三、样本测定
1.分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到nm,蒸馏水调零。
2.打开水浴锅,调节温度到40℃。
3.测定
混匀后置于40℃水浴保温10min,室温冷却10min后于nm测定吸光度,分别记为A空白管、A标准管、A测定管。
注意:需在40min内完成比色。
三、组织无机磷含量计算
无机磷含量(mmol/g质量)=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V总÷W
C标准液:1mmol/L;
V总:上清液总体积,1mL=0.L;
W:样本质量,g。
注意事项:
1、试剂三需临用前配制,限当天使用。
2、测定前先用1~2个样本做预实验,如吸光值大于0.8,需用蒸馏水做相应稀释。