总抗氧化能力检测试剂盒（货号：AKAO）
总抗氧化能力是指各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成的总抗氧化水平，如抗氧化物酶、维生素C、维生素E和胡萝卜素等，为保护细胞和机体免于活性氧自由基造成的氧化应激损伤。通过检测血浆、唾液、尿液等体液、细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力，对全面科学地评价抗氧化物质的抗氧化能力具有重要意义。
本产品采用FRAP（FerricReducingAbilityofPlasma）法测定总抗氧化能力，其原理是酸性条件下抗氧化物可以将Fe-TPTZ还原为蓝色的络合物Fe-TPTZ，产物在nm处具有特征吸收峰，还原物质的含量在一定范围内与吸光值呈比例关系，吸光值的变化可以反映待测样品的还原能力，即样品的总抗氧化能力。
总抗氧化能力检测原理
测定过程中所需要的仪器和试剂：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.样品处理（可根据预实验结果适当调整样本量及比例）
①细菌或细胞：离心收集细菌或细胞至离心管内，按照细菌或细胞数量（10个）：提取液体积（mL）为（-）：1的比例（建议万细菌或细胞加入1mL预冷的提取液），冰浴超声破碎（功率W，超声3s，间隔10s，重复30次），4℃0g离心5min，取上清置于冰上待测。
②组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：（5-10）的比例（建议称取0.1g组织，加入1mL预冷的提取液），冰浴匀浆，4℃0g离心5min，取上清置于冰上待测。
③血清、血浆、唾液或尿液等液体样本：血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用EDTA抗凝），4℃0g离心10min，取上清置于冰上待测；血清、唾液或尿液样品可直接测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30d）后再进行测定。
2.测定步骤
①分光光度计预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
②使用前将FRAP工作液37℃预热20min。
③标准曲线的建立：将40μmol/mLFeSO4标准液使用蒸馏水稀释至0.1、0.05、0.、0.5、0.、0.μmol/mL。
充分混匀，反应10min，蒸馏水调零，测定nm处吸光值，记为A标准和A1空白，计算ΔA标准=A标准-A1空白；以Fe2+终浓度0.05、0.、0.5、0.、0.、0.为横坐标（x），以ΔA标准为纵坐标（y）绘制标准曲线，得到线性回归方程y=kx+b。
④在离心管中依次加入下列试剂：
吸光值测定：测定nm处吸光值，记为A测定和A2空白，计算ΔA测定=A测定-A2空白，将ΔA测定带入标准曲线方程y=kx+b，计算样品浓度x（μmol/mL）。注：空白管只需测定1-2次。
注意事项
①试剂二对人体有刺激性，注意采取适当的防护措施，请穿实验服并戴乳胶手套操作；
②尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的样本，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰；
③样品中不宜添加Tween和NP-40等去垢剂和DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂；
④若ΔA测定超出标准线性吸光值范围，建议适当增加样本量或将样本提取液适当稀释后再进行测定，计算时相应修改；
⑤为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。
ForResearchUseOnly.NotforUseinDiagnosticProcedures.