ADPG焦磷酸化酶（AGP）活性检测试剂盒（微量法）
产品货号：BA
产品规格：管/96样
产品说明:
AGP(EC2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。
AGP催化的逆向反应生成G-1-P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品内容：
溶液的配制：
1.试剂二：临用前每支加入6.4mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存；
2.试剂三：临用前加入2mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存；
3.试剂四：临用前每支加入μL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存；
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。00g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步驟
1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
2.在EP管中按顺序加入下列试剂
混匀后立即在nm波长下记录初始吸光度A1和2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。
二、AGP活性计算
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
1.按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmolNADPH定义为一个酶活性单位。
AGP活性（U/mgprot）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷T÷（Cpr×V样本）=.5×ΔA÷Cpr
（此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度）
2.按照样本质量计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
AGP活性（U/g质量）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷T÷（W×V样本÷V提取）=.5×ΔA÷W
T：反应时间，15min；ε：NADPH消光系数，6.22×10-3mL/nmol/cm；V反总：反应总体积，0.mL；d：石英比色皿光程，1cm；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V样本：加入的样本体积，0.mL；V提取：加入的提取液体积，1mL；W：样本质量，g。
b.使用96孔UV板测定的计算公式如下：
1.按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmolNADPH定义为一个酶活性单位。
AGP活性（U/mgprot）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷T÷（Cpr×V样本）=.1×ΔA÷Cpr
（此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度）
2.按照样本质量计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
AGP活性（U/g质量）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷T÷（W×V样本÷V提取）=.1×ΔA÷W
T：反应时间，15min；ε：NADPH消光系数，6.22×10-3mL/nmol/cm；V反总：反应总体积，0.mL；d：96孔板光程，0.6cm；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V样本：加入的样本体积，0.mL；V提取：加入的提取液体积，1mL；W：样本质量，g。
注意事项：
如果一次性测定样本较多，可以将试剂一、二按比例配成混合液1，将试剂一、三、四和五按比例配成混合液2。