临床微生物大讲堂（）时间：9月21号，晚上8:00讲者：钱雪琴上海市公共卫生临床中心题目：如何提高临床标本中抗酸杆菌涂片阳性率
嘉宾：王医院温海医院朱俊昌甘医院医院主持：医院范医院
答疑
1、是什么原因造成最后一种假阳性呢？脱色没脱干净吗？
答：造成假阳性的原因有：1、第一液加的量少，在染色期间出现干燥，2、冲完第一液后，未将水沥干，脱色液加的量少，脱色时间短（一般脱色2分钟），脱色不彻底，3、痰液中的食物残渣。
2、溶痰用的次氯酸钠的浓度多少？结核杆菌抗酸染色阳性，弱抗酸是阳性吗？
答：一般为5%的浓度，结核杆菌弱抗酸是阳性。
3、我们用夹层杯，胸腹水和脑脊液要一定要NaOH处理吗？
如果夹层杯制作的片子，脱色时没有涂膜脱落现象，可以不用处理。
4、请问所有离心操作都是加盖离心吗？所有离心管都是一次性的吗？成本如何？谢谢老师
答：我们结核室所有离心都是低温离心，所有离心管都是一次性尖底离心管，成本没计算过。
5、钱老师提到蒸馏水最好要新鲜的，新鲜蒸馏水如何获得呢？灭菌后放置一段时间的可以吗？
答：新鲜蒸馏水可以从生化制水机中取，灭菌后放置冰箱可以。
6、请问老师，多次离心，会增加感染的机会吗？
答：是的，可以考虑购买带安全罩的低温离心机
7、我们用的也是消化离心夹层杯法，试剂商说NaOH能杀死抗酸菌。对此我表示怀疑，然后做了三次试验，将消化后的标本去培养，其中有两次是培养阴性，一次培养阳性。所以，我想知道NAOH到底能不能杀死抗酸菌？
答：能杀死20%-90%的分枝杆菌
8、钱老师，你们痰标本阳性率很高了。标本合格率怎么样；数据统计按人次，还是标本次数；还有就是刚才钱老师提到及时痰、夜间痰和晨痰，这3类标本哪种阳性率高。
答：标本合格率没统计过，最开始开展结核检查时，标本质量挺好的，后来质量有所下降，我最初是将做病理、做一般菌检测的标本都收集过来，做涂片或培养。数据统计是按人次，有时，一个病人可能会做2-3次涂片，有一张阳性我们就按阳性处理。文献说晨痰阳性率高。
9、没有NaOH，用KOH可以吗，浓度也一样吗?胸腹水加抗凝剂是否会影响培养?还是说加抗凝剂仅用于结核涂片
答：文献中均为NaOH消化，我们没试过KOH消化，可以试试看。加抗凝剂是否会影响培养，肝素和SPS抗凝不影响培养，EDTA抗凝会影响培养。
10、请问痰液所用离心管是哪种类型？
答：50ml尖底离心管。BD和拱东均有售。
11、钱老师您好！我想问：1您提用晨尿可以提高阳性率，但在菌量少的情况下，是不是像书里留24小时的尿，但没有防腐有影响吗？2肝素抗凝的标本有影响一般细菌培养？（因为我们做一般细菌培养还要做涂片，医生送一管无菌管的给我们
答：涂片可以使用24小时尿液，但要注意冷藏和无菌操作，不要加防腐剂。肝素和SPS抗凝不会影响一般菌培养。
12、水洗标本时蒸馏水用40到50ml，用什么容器离心！我们就是一般离心机，怎么用？
答：可以先将标本倒入15ml尖底离心管，如果标本量多时，可用多个离心管离心，离心后，去上清，集中到一管，再用蒸馏水加至15ml洗，混匀，离心，去上清，加3滴蒸馏水混匀涂片。
13、请问钱老师有没有做过细胞离心机对提高脑脊液结核杆菌检出率的影响？
答：没做过
14、我们实验室的就有许多小离心机，上面的数值都可以达到g，可信吗？
答：这个问题可以咨询厂商，我们用的是可以放50ml尖底离心管的进口低温离心机。
15、请教各位老师，你们次氯酸钠消化痰消化多长时间？
答：我们一般为5-10分钟左右
16、抗酸杆菌的室内质控怎么做？
答①自查和互查：抽查复检当日10%涂片，并做登记。要求：抗酸杆菌阳性片符合率≥98%，阴性片符合率≥96%，不允许1+以上的阳性片出现假阴性。②涂片脱落面积应在10%以下。③抗酸染色每天染自制的阳性和阴性质控片，荧光染色每批次均要染自制的阳性和阴性质控片，监测染液质量和染色效果合格。
17、钱老师，你们阳性率好惊人！我们用的是浓缩消化离心夹层杯法，平均每天30个左右的痰标本，阳性率是30左右。请问你们的痰标本是多少呢？
答：我们每天涂片量平均在50-70张，标本种类比较复杂：脓、体液、粪便、灌洗液、拭子等。
18、感谢各位老师，请问下，直接涂片法拨片在生物安全柜紫外灯照射1小时可以把结核杆菌杀死吗？医院，工作量大，人员不足的情况下，如何做到自身保护？需要注意哪些问题
答：①不能杀死，在自然条件下结核杆菌在室内阴暗潮湿处能存活半年;在干燥的痰中于阴暗处可存活6～8个月;在随尘土飞扬的空气中可保持传染性8～10d;在污染的图书上可存活3个月;3℃条件下存活1年,-6～-8℃环境下可存活4～5年。结核分枝杆菌对环境理化因子抵抗力比一般细菌繁殖体强。对湿热敏感，65℃加热30分钟或80℃以上加热5分钟就可以将其杀灭，痰标本中结核菌需在℃煮沸5分钟才可杀灭。结核分枝杆菌对干燥和干热耐力较强，在干燥痰中可存活数周。干热℃作用2h可达到杀菌目的,杀灭痰中的结核杆菌则需3h以上。结核分枝杆菌对紫外线敏感，日光照射2小时以上可杀灭暴露在物体上的细菌，紫外线灯照射可杀灭物体表面和空气中结核分枝杆菌。结核分枝杆菌对多数化学消毒剂比较敏感，75％酒精作用5分钟即可将其杀灭；5％的苯酚或来苏儿均可在５分钟内将其杀灭；0mg/LCH3COOOH作用２小时可杀灭尿液内和痰中的结核分枝杆菌。
②标本处理、结核菌涂片染色、培养和药物敏感实验、免疫血清学检查等检测可在生物安全II级实验室进行。
③实验室配置生物安全柜、低温冷冻离心机、N95口罩、一次性防护衣、一次性鞋套、一次性帽子、最好配备负压实验室。不要边加热边涂片，涂片自然干燥后固定染色。
19、次录酸钠的浓度
答：5%
20、钱老师，你提到的血浆，如果血常规的血标本经过离心后得到的血浆可以用吗
答：如果用患者血浆，1:15稀释后做涂片，如果抗酸杆菌镜检阴性，可以使用。
21、次录酸钠需灭菌吗？
答：不需要，它本身为消毒剂。
22、请问，5%的次氯酸钠溶液可以用84液配置吗
答：没试过，最好购买商品化的试剂，我们用的为贝索生产的溶痰剂。
23、钱老师，紫外灯照射玻片的距离1米和0.5米的灭菌效果有没有区别？
答：没研究过
24、钱老师，对于骨与关节结核感染临床诊断非常困难，我们实验室经常收到关节液或术中组织，钱老师在这两种标本结核菌涂片方面有什么经验方法可以提高阳性率的。
答：关节液如果不是脓性，可以参照胸腹水涂片方法；如果是脓性，用2%-4%的氢氧化钠消化，再用蒸馏水或PBS稀释碱性，离心，去上清，加3滴蒸馏水混匀涂片，切记涂片要薄。如果是组织，可以用剪刀剪碎，再用2%-4%的氢氧化钠消化，消化时间1小时左右，后续操作同脓。记住剪刀用后要用酒精消毒，流水多冲洗几遍，防止交叉污染。
25、请问钱老师，就是血浆用生化，或者血常规的都可以吗，另外你们的抗酸染色用仪器和手工染色两者阳性率有区别吗，谢谢
答：血浆建议用血库献血者的血浆，我们涂片曾经做过患者的血液抗酸杆菌涂片1+的结果，如果用患者血浆，稀释后做涂片，如果抗酸杆菌镜检阴性，可以使用。
仪器染色和手工染色没比对过，我们是偶尔使用仪器染色，出现过涂膜脱落现象。
26、请问ks的自动染色仪加热到50度与火焰固定效果有差别吗?
答：我们是没试过，可以一份标本涂两张，试试看。
钱雪琴