一、气相色谱仪检测肉及肉制品中乙烯利残留量的方法原理:
试样中的乙烯利残留用甲醇提取,提取液经冷冻除去脂肪和蜡质,然后浓缩,待测物再用乙醚提取并经重氮甲烷衍生化,使乙烯利衍生成二甲基乙烯利后,用配有氮磷检测器的气相色谱仪测定,外标法定量。
二、气相色谱仪检测肉及肉制品中乙烯利残留量的试剂材料:
1、试剂:
1.1氢氧化钾(KOH):分析纯。
1.2甲醇(CH3OH):重蒸馏。
1.3N-甲基-N-亚硝基-对甲苯磺酰胺(C8H10N2O3S)。
1.4无水乙醇(CH3CH2OH)。
1.5无水乙醚:(C4H10O):重蒸馏。
1.6无水硫酸钠(Na2SO4):℃灼烧4h,置于密封容器中备用。
2、溶液配制:
2.1甲醇-盐酸(38%)溶液:90+10。
2.2重氮甲烷溶液:将盛有氢氧化钾水溶液(0.6g/mL)10mL,乙醇35mL及乙醚10mL的混合液的双口蒸馏瓶置于磁力搅拌器加热板上的水浴中。将搅拌子放入瓶中,接上滴液漏斗和高效冷凝器,冷凝器后串联两个mL的烧瓶作为接收瓶。在第二个烧瓶中放有10mL乙醚,且将入口管插到乙醚液面以下。将这两个接收瓶置于冰水浴中。将水浴加温至70℃,边用磁力搅拌器搅拌,边从滴液漏斗中滴加N-甲基-N-亚硝基-对甲苯磺酰胺的乙醚溶液(21.5g/mL)。滴完全部溶液的时间控制在20min以上,当蒸馏液呈淡黄色时,停止蒸馏。将两个接收瓶中的液体合并,作为重氮甲烷溶液。如果含杂质太多可再重蒸馏。此溶液密闭置于冰箱中保存,保存期为一个月。
3、标准品:
3.1乙烯利标准品:纯度≥99%
3.2标准溶液配制:
乙烯利标准溶液:准确称取适量的乙烯利标准品,用甲醇配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备液,根据需要再用甲醇稀释标准储备液以制备适当浓度的标准工作液。注:配置标准溶液时,均应使用聚乙烯器皿。
三、气相色谱仪检测肉及肉制品中乙烯利残留量的仪器设备:
1、气相色谱并配有氮磷检测器。
2、分析天平:感量0.01g和0.g。
3、快速混合器。
4、离心器:r/min。
5、聚乙烯烧瓶:mL具塞。
6、聚乙烯烧杯:mL。
7、微量注射器:10μL或5μL。
8、超声波浴。
四、气相色谱仪检测肉及肉制品中乙烯利残留量的分析步骤:
1、提取:
称取约20g试样(精确至0.1g)于聚乙烯烧杯中加入甲醇-盐酸(90+10)溶液0.5mL和甲醇40mL,于超声波浴中提取5min。转入离心管离心(r/min)2min后,用聚乙烯管将上部清液吸入具塞mL聚乙烯烧瓶中。残渣再用40mL甲醇按上述步骤提取一次,合并提取液于同一聚乙烯烧瓶中。
2、净化:
将盛有甲醇提取液的聚乙烯烧瓶,放入-18℃以下的冰柜中冷冻4h。取出后迅速转入离心管中离心(r/min)5min。将上层清液倾入用二甲基二氯硅烷处理过的mL心形瓶中。剩下的残渣用2mL冷冻过的甲醇洗涤,洗液转移到同一心形瓶中。用旋转蒸发器在30-35℃水浴上浓缩至约60mL。将浓缩液转移到用二甲基二氯硅烷处理过的mL容量瓶中。用少量甲醇洗涤心形瓶,洗液并入容量瓶内。用甲醇定容。
3、衍生化:
吸取10.0mL上述溶液,放入15mL具塞刻度离心管中,在干燥氮气流下于30-35℃水浴中浓缩至约1.5mL。加入0.5mL甲醇-盐酸溶液(90+10)和8mL无水乙醚,充分混合,放置10min。
将上层清液倾入另一个具塞刻度管中,用2×1mL无水乙醚洗涤残渣。洗液并入上述清液中。于氮气流下在30-35℃水浴上浓缩至约1mL。
在通风柜内,向浓缩液里滴加重氮甲烷溶液,直至黄色不褪为止。盖严塞子,放置15min。用氮气流把过量的重氮甲烷吹除。再用2×5mL水洗涤,每次离心(r/min)2min,弃去下层水相。用氮气流在30-35℃水浴中浓缩至约0.8mL,用无水乙醚稀释到1.00mL。溶液经用约0.5g无水硫酸钠脱水后供气相色谱测定。
4、标准溶液的衍生化:
取适量的乙烯利标准工作液,置于mL具塞聚乙烯烧瓶里,加入重氮甲烷溶液,直至黄色不褪为止。盖严塞子,放置15min。用氮气流把过量的重氮甲烷吹除,这时溶液变为无色。将烧瓶置于30-35℃水浴中在氮气流下浓缩至近干,用无水乙醚溶解残渣并稀释至所取标准工作液的同样体积。
5、测定:
5.1气相色谱参考条件:
a)色谱柱:不锈钢柱,2m×3mm(内径),填充物为3%(m/m)FFAP涂于ChromosorbG,AW,DMCS(60-80目);
b)载气:氮气,纯度≥99.9%,50mL/min
c)氢气:4mL/min;。
d)空气:mL/min
e)色谱柱温度:℃
f)进样口温度:℃
g)检测器温度:℃
h)进样量:1μL
5.2色谱测定:
根据试样中被测农药含量情况,选定峰高相近的标准工作溶液,标准工作溶液和待测样液中农药衍生化物的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对标准溶液与样液应等体积参插进样测定。在上述色谱图条件下,乙烯利衍生物(二甲基乙烯利)的保留时间约1.6min。
五、气相色谱仪检测肉及肉制品中乙烯利残留量的结果计算: