在实验过程中,检测土壤β-葡萄糖苷酶(Solid-β-Glucosidase,S-β-GC)的方法有很多种,今天我们了解一下用(可见分光光度法)来检测土壤β-葡萄糖苷酶的具体操作方法:
提示:在正式实验测定前,为更好的进行下一步的实验,务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
本图片仅供参考,以实物为准β-葡萄糖苷酶的测定意义:S-β-GC能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
土壤β-葡萄糖苷酶的测定原理:S-β-GC能够催化对-硝基苯-β-D吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在nm有特征光吸收。
实验中需要自备的用品:可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
本图片仅供参考,以实物为准试剂组成和配制:
试剂一:甲苯5mL×1瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×2瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入10mL蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂三:液体25mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体50mL×1瓶,4℃保存;测定步骤:
测定步骤表格充分混匀,室温静置2min后,nm处蒸馏水调零,测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-β-GC活力计算:标准条件下测定的回归方程为y=0.x-0.;x为标准品浓度(μmol/L),y为吸光值。
单位的定义:每天每g土样中产生1μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
具体结果的计算方法,根据说明书上来的计算方法来计算,对于新手来讲,如果实验有难度,可以委托厂家进行实验技术操作,每个步骤必须严格按照实验说明书上来操作,未用完的试剂,请妥善保存好,不能随便丢弃。