羟自由基清除能力测定试剂盒说明书

微量法管/96样

注意：正式测定之前选择2-个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。

测定原理：

H2O2/Fe2+通过Fenton反应产生羟自由基，水杨酸能有效捕捉产生的羟自由基并与其反应生成有色物质2，-二羟基苯甲酸，在nm处有最大吸收峰，加入具有清除能力的物质后，有色物质便会减少，从而可以根据吸光值的数值判断样品清除羟自由基的能力。

自备实验用品：

恒温水浴锅、酶标仪、96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一：液体12mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体12mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体22mL×1瓶，4℃避光保存。

样品的制备：

1.组织：按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水）进行冰浴匀浆，然后00g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2.血清、果汁等液体样品可直接测定。

.提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如5mg/mL。

操作步骤：

1、酶标仪预热0min，调节波长至nm。

2、在EP管中加入如下试剂

注意：空白管和对照管只需测定一次。

计算公式:

羟自由基清除率D%=（A对-A测）÷（A对-A空）×%

A对、A空、A测：对照管、空白管和测定管的吸光值

。

注意事项:

为了比较不同样品羟自由基清除能力，对于同一批样品必须加入等量的样品，血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。

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