磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根,参与生物体内多种代谢,包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率,进而为合理施肥提供依据。
测定原理:
总磷经消化后,转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法,一定条件下,钼蓝与磷酸根生成nm有特征吸收峰的物质,通过测定nm光吸收,即可计算无机磷含量,进而可计算出组织中总磷含量。
需自备的试剂和器材:
1.可见分光光度计/酶标仪
2.37℃恒温箱
3.系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
4.去离子水或蒸馏水
产品组成:
实验步骤:
一、有机磷消化(具体比例可以参考文献)
称取约0.1g组织于带盖试管中,加浓硫酸1.0mL,盖紧(封口膜封口,防止水分散失)后沸水浴10min左右,待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后,加试剂一μL,充分混匀,盖紧后继续沸水浴,直到溶液呈透明状,取出室温冷却后,加蒸馏水3.8mL,充分混匀;室温,rpm,离心10min,取上清液,待测。
二试剂准备
溶液的配制:
1、试剂R1:强腐蚀性,强氧化性;
2、试剂R3:临用前配制,加入10mL蒸馏水,溶解后再加入5mL试剂R2,混匀;
3、标准品:1mmol/L无机磷标准液。
三、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上,调节波长到nm,蒸馏水调零。
2、打开水浴锅,调节温度到40℃。
3、样本测定
混匀后置于40℃水浴保温10min,室温冷却10min后于nm测定吸光度,分别记为A空白管、A标准管、A测定管。
四、组织总磷含量计算
总磷含量(mmol/g)=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V总÷W
C标准液:标准溶液;
V总:上清液总体积;
W:样本质量,g。
注意事项:
1、试剂三需临用前配制,限当天使用。
2、测定前先用1~2个样本做预实验,如吸光值大于0.8时,需用蒸馏水做相应稀释。