检测品控饲料中游离棉酚的测定方法

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游离棉酚分子式

饲料中游离棉酚的测定方法GB-本标准参照采用国际标准ISO-《动物饲料中游离棉酚和总棉酚的测定》。

1、主题内容与适用范围

本标准规定了饲料中游离棉酚的测定方法。本标准适用于棉籽粉、棉籽饼(粕)和含有这些物质的配合饲料(包括混合饲料)中游离棉酚的测定。

2、原理

在3-氨基-1-丙醇存在下用异丙醇与正已烷的混合溶剂提取游离棉酚,用苯胺使棉酚转化为苯胺棉酚,在最大吸收波长nm处进行比色测定。

3、试剂和溶液

除特殊规定外,本标准所用试剂均为分析纯水为蒸馏水或相应纯度的水。3.1 异丙醇〔(CH3)2CHOH〕。3.2 正已烷。3.3 冰乙酸。3.4 苯胺(C6H5NH2):如果测定的空白试验吸收值超过0.时,在苯胺中加入锌粉进行蒸馏,弃去开始和最后的10%蒸馏部分,放入棕色的玻璃瓶内贮存在0~4℃冰箱中,该试剂可稳定几个月。3.5 3-氨基-1-丙醇(H2NCH2CH2CH2OH)。3.6 异丙醇-正已烷混合溶剂:6:4(V/V)。3.7 溶剂A:量取约mL异丙醇-正已烷混合溶剂、2mL3-氨基-1-丙醇、8mL冰乙酸和50mL水于mL的容量瓶中,再用异丙醇-正已烷混合溶剂定容至刻度。

4、仪器、设备

4.1 分光光度计:有10mm比色池,可在nm处测量吸光度。4.2 振荡器:振荡频率(~)次/min(往复)。4.3 恒温水浴。4.4 具塞三角烧瓶:、mL。4.5 容量瓶:25mL(棕色)。4.6 吸量管:1、3、10mL。4.7 移液管:10、50mL。4.8 漏斗:直径50nm。4.9 表玻璃:直径60nm.

5、试样制备

采集具有代表性的棉籽饼样品,至少2kg,四分法缩分至约g,磨碎,过2.8mm孔筛,混匀,装入密闭容器,防止试样变质,低温保存备用。

6、测定步骤

6.1 称取1g~2g试样(精确至0.g),置于mL具塞三角瓶中,加入20粒玻璃珠,用移液管准确加入50mL溶剂A,塞紧瓶塞,放入振荡器内振荡1h(每分钟次左右)。用干燥的定量滤纸过滤,过滤时在漏斗上加盖一表玻璃以减少溶剂挥发,弃去最初几滴滤液,收集滤液于mL具塞三角瓶中。6.2 用吸量管吸取等量双份滤液5mL~10mL(每份约含50μg~μg的棉酚)分别至两个25mL棕色容量瓶a和b中,如果需要,用溶剂A补充至10mL。6.3 用异丙醇-正已烷混合溶剂稀释瓶a至刻度,摇匀,该溶液用作试样的参比溶液。6.4 用移液管吸取2份10mL的溶剂A分别至两个25mL棕色容量瓶a0和b0中。6.5 用异丙醇-正已烷混合溶剂补充瓶a0至刻度,摇匀,该溶液用作空白测定液的参比溶液。6.6 加2.0mL苯胺于容量瓶b和b0中,在沸水浴上加热30min显色。6.7 冷却至室温,用异丙醇-正已烷混合溶剂定容,摇匀,并静置1h。6.8 用10mm比色池,在波长nm处,用分光光度计以a0为参比溶液测定空白测定液b0的吸光度,以a为参比溶液测定试样测定液b的吸光度,从试样测定液的吸光度值中减去空白测定液的吸光度值,得到校正吸光度A。

7、测定结果

7.1 计算公式X=A*1.25*000/amv……………………………………(1)式中:X——游离棉酚含量,mg/kg;A——校正吸光度;m——试样质量,g,V——测定用滤液的体积,mL;a——质量吸收系数,游离棉酚为62.5cm-1#;g-1#;L.7.2 结果表示每个试样取2个平行样进行测定,以其算术平均值为结果。结果表示到20mg/kg。

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