肌酸激酶活性检测试剂盒（紫外分光光度法）
产品货号：BA
产品规格：50管/48样
产品简介：
肌酸激酶（CreatineKinase，CK）(EC2.7.3.2)也成为肌酸磷酸激酶，主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中，能可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应，是一个与细胞能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶。
CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH，导致nm光吸收值增加，以此来表示CK酶活。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品内容：
溶液的配制：
1.试剂一：临用前加10mL蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
2.试剂二：临用前加入0.5mL蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
3.试剂三：临用前取1支加入0.5mL蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
4.试剂四：临用前加入0.65mL蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
5.工作液：临用前根据用量将试剂一、试剂二、试剂三、试剂四、试剂五以70:4:7:10:90的比例混合（体积比）。现用现配。使用前室温孵育20min（该步骤不可省略）。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、恒温水浴锅、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1.组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
2.血清样本：直接测定。
3.细胞样本：按照细胞数量（个）：提取液体积（mL）为~：1的比例（建议万细胞加入1mL提取液）加入提取液，冰浴超声波破碎细胞（功率w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，g离心10min，取上清待测。
二、测定步骤
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至nm，用蒸馏水调零。
2.操作表：在1mL比色皿中加入下列试剂
三、CK活性计算
(1)按组织蛋白浓度计算：
酶活定义：37℃，pH7.0时，每毫克蛋白质每分钟催化产生1nmolNADPH为一个酶活单位。
CK活性（U/mgprot）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷(V样×Cpr)÷T=×ΔA÷Cpr
(2)按组织样本质量计算：
酶活定义：37℃，pH7.0时，每克样本每分钟催化产生1nmolNADPH为一个酶活单位。
CK活性（U/g质量）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷(V样÷V样总×W)÷T=×ΔA÷W
(3)按血清体积计算：
酶活定义：37℃，pH7.0时，每mL血清每分钟催化产生1nmolNADPH为一个酶活单位。
CK活性（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷V样÷T=×ΔA
(4)按细胞数量计算：
酶活定义：37℃，pH7.0时，每1万个细胞每分钟催化产生1nmolNADPH为一个酶活单位。
CK活性（U/cell）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T=×ΔA÷细胞数量
ε：NADPH的摩尔消光系数，6.22×L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，0.L；V样：反应体系中样本体积，0.2mL；V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；细胞数量：以为单位计算，万个；T：反应时间，3min；：单位换算系数，1mol=nmol。
注意事项：
1.血清的CK不稳定，采集样本后尽快测定，4℃避光保存可稳定24h。
2.样本蛋白质含量需要另外测定。
3.OD值大于0.6可用提取液适当稀释样本，并在计算公式中相应的改变稀释倍数。
4.ΔA空白管一般不超过0.01。