H2S含量测定试剂盒(微量法)
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
产品货号:BA
产品规格:管/96样
产品简介:
H2S是一种新型气态信号分子,存在于脑内的神经递质,生理浓度的H2S对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用,并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。
H2S与醋酸锌、N,N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在nm处有最大吸收峰,通过测定其吸光值可计算H2S含量。
产品内容:
提取液:液体mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体8mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体8mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体8mL×1瓶,4℃保存。
试剂五:液体1.5mL×1管,4℃避光保存。
需自备的仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
操作步骤:
一:样品处理:
1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后00g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、细菌、真菌:按照细胞数量(个):提取液体积(mL)为~0:1的比例(建议万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后00g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3、血清(浆):直接测定。
二、操作表:
1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至nm。
2、操作表
三、H2S含量计算公式:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线回归方程为:y=0.x,R2=0.
(1)组织样品
a.按照蛋白浓度计算
H2S(μmol/mgprot)=A÷0.×V反总÷(V样×Cpr)×10-3=0.×A÷Cpr
b.按照样本重量计算
H2S(μmol/g)=A÷0.×V反总÷(V样÷V样总×W)×10-3=0.×A÷W
(2)液体样品H2S(μmol/L)=A÷0.×V反总÷V样=×A
(3)细胞
H2S(μmol/cell)=A÷0.×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量(万个))×10-3=0.×A÷细胞数量(万个)
V反总:反应总体积,0.24mL;V样:反应中样品体积,0.mL;V样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线回归方程为:y=0.x,R2=0.
(1)组织样品
a.按照蛋白浓度计算
H2S(μmol/mgprot)=A÷0.×V反总÷(V样×Cpr)×10-3=1.×A÷Cpr
b.按照样本重量计算
H2S(μmol/g)=A÷0.×V反总÷(V样÷V样总×W)×10-3=1.×A÷W
(2)液体样品H2S(μmol/L)=A÷0.×V反总÷V样=1×A
(3)细胞
H2S(μmol/cell)=A÷0.×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量(万个))×10-3=1.×A÷细胞数量(万个)
V反总:反应总体积,0.24mL;V样:反应中样品体积,0.mL;V样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL
注意事项:
最低检出限为8μmol/L。