看白癜风专业的医院 http://pf.39.net/bdfyy/bjzkbdfyy/150423/4613585.html过氧化物酶（POD）是过氧化物酶体的典型标志酶，是一类氧化还原酶，它能催化很多生理生化反应。过氧化物酶是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶，主要存在于载体的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢，氧化酚类和胺类化合物和烃类氧化产物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类、醛类、苯类毒性的双重作用。过氧化物酶是广泛存在于各种动物、植物和微生物体内，是植物在逆境条件下酶促防御系统的关键酶之一，与超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)协同作用，清除体内过剩的自由基，从而提高植物的抗逆性。此外，POD还可氧化分解吲哚乙酸(IAA)，从而影响植物的生长发育。过氧化物酶还能使组织中所含的某些碳水化合物转化成木质素，增加木质化程度，因此过氧化物酶可作为组织老化的一种生理指标。植物科学领域现行对过氧化物酶活性测定的方法为愈创木酚比色法，目前在试剂耗材供销市场上有很多生化试剂盒、微量法试剂盒大都基于这个比色法原理。医学临床上主流的则是生化检测仪、ELISA酶联免疫的测定方法。愈创木酚比色法测定植物根系中的POD活性1.待测样品油菜幼苗地上部组织。2.实验试剂以下所有试剂如无特别说明，均为分析纯。实验用水为去离子水或蒸馏水。（1）磷酸缓冲液的配制：A液：0.2M的KH2PO4溶液分析纯KH2PO4?27.克，用蒸馏水定容至毫升。B液：0.2M的K2HPO4溶液分析纯K2HPO4?3H2O?45.克，用蒸馏水定容至毫升。或者：A液：0.2M的NaH2PO4溶液分析纯NaH2PO4?2H2O?31.21克，用蒸馏水定容至毫升。B液：0.2M的Na2HPO4溶液分析纯Na2HPO4?12H2O?71.64克，用蒸馏水定容至毫升（2）POD酶促反应液的配制：0.1M?pH=6.0磷酸缓冲液的配制：A液.25+B液30.75，定容至毫升；POD反应液的配制：0.1M?pH=6.0的磷酸缓冲液50毫升于烧杯中，加入愈创木酚28微升，磁力搅拌器加热搅拌使之完全溶解，冷却后加入30%H2O微升混合，保存于冰箱中。3.实验仪器分光光度计、离心机、万分之一分析天平、烧杯、ml容量瓶、研钵、吸管(10ml)、50ml离心管、试管夹、吸耳球、记号笔等。4.酶液的制备称取0.5g放入研钵中，加5毫升磷酸缓冲液，冰浴研磨，匀浆倒入离心管中，冷冻离心20分钟（0×g），上清液（酶液）倒入试管中，置于0～4℃下保存待用。5.实验步骤POD的测定：20微升酶液+3毫升反应液于比色皿中，在nm下每隔1分钟读数一次，共读三次，以每分钟吸光度变化值（ΔA/min·mg?pr或ΔA/?mgFW）表示酶活力的大小。6.结果计算以每分钟OD值变化（升高）0.01为1个酶活性单位（U）。式中：ΔA---反应时间内吸光度的变化；W-------样品鲜重(g)；t---------反应时间(min)；Vt-------提取酶液总体积（ml，1.6ml）；Vs-------测定时取用酶液体积（ml，30ul）。（1）王学奎，黄见良.植物生理生化实验原理与技术（第3版）．北京：高等教育出版社，.（2）李合生，王学奎．现代植物生理学（第4版）.北京：高等教育出版社，.（3）田国忠,李怀方,裘维蕃.植物过氧化物酶研究进展[J].武汉植物学研究,.（4）杨居荣,蒋婉茹.Cd污染对植物生理生化的影响[J].农业环境科学学报,():-.（5）代岳宸,董连新,淦静怡,等.不同植物生长调节剂及叶面肥在抑制甜瓜早衰过程中的应用[J].现代园艺,,45(7):4.（6）赵萍,唐红,刘兴宇,等.紫斑牡丹单瓣与半重瓣花粉超微结构及生理生化特性比较[J].西北植物学报,.预览时标签不可点收录于合集#个上一篇下一篇
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