纤维素（CLL）含量检测试剂盒（货号：AKSU）
纤维素是自然界中分布最广、含量最多的一种大分子多糖，能够与半纤维素、果胶及木质素结合形成植物细胞壁的主要结构成分。纤维素是由β-D-葡萄糖以β-1,4-糖苷键连接而成的直链多聚体，经过特定的物化改性后可具有不同的功能特性，以纤维素及其衍生物为原料制作的产品广泛应用于食品加工、纺织、造纸、精细化工、能源再生、电力及科研器材等领域。
纤维素在酸性条件下可水解为β-D-葡萄糖，β-D-葡萄糖在强酸环境中脱水生成β-糠醛类化合物，与蒽酮脱水缩合生成蓝绿色糠醛衍生物，产物在nm处具有特征吸收峰，通过吸光值变化即可定量检测纤维素含量。
纤维素检测原理需自备试剂：无水乙醇（CHO，MW=46.07，CAS:64-17-5）；丙酮（CHO，MW=58.08，CAS:67-64-1）；浓硫酸（HSO，MW=98.，CAS:-93-9）
测定过程中所需要的仪器和试剂：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵或匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴、无水乙醇、浓硫酸、丙酮和蒸馏水。
1.纤维素的提取（可根据预实验结果适当调整样本量）
（1）细胞壁物质（CWM）的提取
①称取0.3g（记为W1）样本，加入1mL提取液A，室温快速匀浆（若样品质地坚硬，可先粉碎或研磨后再进行提取），90℃水浴20min，冷却至室温，g常温离心10min，弃上清，留沉淀；
（注：水浴加热过程中离心管盖有爆开的可能，建议使用胶带封口或使用带卡扣的离心管）
②沉淀使用1.5mL提取液A和丙酮各清洗2遍（涡旋振荡2min，g常温离心10min，弃上清），沉淀即为粗细胞壁；
③粗细胞壁中加入1mL提取液B混匀，浸提15h，g常温离心10min后弃上清，将沉淀干燥后（80-℃短时烘干至恒重），即为细胞壁物质（CWM），称重记为W2。
（2）纤维素提取
称取细胞壁物质5mg（记为W3）于离心管中，加入0.5mL蒸馏水，冰浴研磨至匀浆，冰水浴中缓慢加入0.75mL浓硫酸，冰水浴静置30min，4℃g离心10min后取上清液，蒸馏水稀释20倍后即为待测样品。（注：若烘干物质质地坚硬，可先研碎后再加入0.5mL蒸馏水匀浆）
2.测定步骤
①分光光度计预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
②在离心管中依次加入下列试剂：
吸光值测定：反应结束后冷却至室温，测定nm处吸光值，记为A测定、A标准和A空白；计算ΔA测定=A测定-A空白，ΔA标准=A标准-A空白。注：空白管只需测定1-2次。
标准曲线的建立：以0.09、0.07、0.05、0.、0.、0.mg/mL为横坐标（x），以其对应的ΔA标准为纵坐标（y），绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入公式中得到x（mg/mL）。
注意事项
①若ΔA测定超出标准线性吸光值范围，建议适当增加样本量或扩大提取液的稀释倍数后再进行测定，计算时相应修改；
②显色液组分B挥发性强且具有刺激性气味，建议在通风橱中进行显色液的配制，注意做好防护；
③浓硫酸具有强腐蚀性，操作时各个步骤均需特别注意：提取纤维素过程中，为保障自身安全，且防止冰水混合物进入离心管中造成试验误差，置于冰水浴中的离心管需较好固定；纤维素提取在加入浓硫酸时，建议枪头伸入样本液面以下缓慢加入，以防止液面沸腾烫伤及样本碳化；95℃水浴结束取出后需冷却至室温再打开离心管盖，以防液体飞溅烧伤；
④为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。
ForResearchUseOnly.NotforUseinDiagnosticProcedures.