脂肪酸合成酶（FAS）活性检测试剂盒（微量法）
产品货号：BA
产品规格：管/96样
产品简介
FAS是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A而生成长链脂肪酸。FAS普遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。
FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成长链脂肪酸和NADP+；NADPH在nm有吸收峰，而NADP+没有；通过测定nm光吸收下降速率，计算FAS活性。
产品内容：
试剂一：液体×1瓶，-20℃保存。用前1d取出置于4℃充分解冻后混匀。
试剂二：粉剂×1瓶。临用前加入μL试剂四，充分溶解。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入μL试剂四，充分溶解。
试剂四：液体×1瓶，4℃保存。
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入μL试剂四，充分溶解。
需自备的仪器和用品：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。
操作步骤（仅供参考）：
一、粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1:5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。rpm，4℃离心40min，取上清置于冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（个）：提取液体积（mL）为-0:1的比例（建议万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率w，超声3秒，间隔7秒，总时间3分钟）；然后rpm，4℃离心40min，取上清置于冰上待测。
二、FAS测定操作：
1.分光光度计预热30min，调节波长到nm，蒸馏水调零。
2.试剂四置于40℃水浴中预热30min以上。
3.空白管：在μLEP管中依次加入20μL蒸馏水、4μL试剂二、4μL试剂三、μL试剂四和8μL试剂五，迅速混匀后于nm处测定吸光值，记录第30s和90s时吸光值，分别记录为A1和A2。△A空=A1-A2。
4.测定管：在μLEP管中依次加入20μL上清液、4μL试剂二、4μL试剂三、μL试剂四和8μL试剂五，迅速混匀后于nm处测定吸光值，记录第30s和90s时吸光值，分别记录为A1和A2。△A测=A3-A4。
三、FAS活性计算：
使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmolNADPH为1U。
FAS(U/mgprot)=[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×]÷(Cpr×V样)÷T
=1.61×(△A测定管–△A空白管)÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化1μmolNADPH为1U。
FAS(U/g)=[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×]÷(W×V样÷V样总)÷T
=1.61×(△A测定管–△A空白管)÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：37℃中每个细胞每分钟氧化1μmolNADPH为1U。
FAS(U/cell)=[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=1.61×(△A测定管–△A空白管)÷细胞数量
ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，μL=2×10-4L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；T：反应时间，1min。
使用96孔板测定的计算公式如下：
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmolNADPH为1U。
FAS(U/mgprot)=[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×]÷(Cpr×V样)÷T
=3.22×(△A测定管–△A空白管)÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化1μmolNADPH为1U。
FAS(U/g)=[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×]÷(W×V样÷V样总)÷T
=3.22×(△A测定管–△A空白管)÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：37℃中每个细胞每分钟氧化1μmolNADPH为1U。
FAS(U/cell)=[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=3.22×(△A测定管–△A空白管)÷细胞数量
ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V反总：反应体系总体积，μL=2×10-4L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；T：反应时间，1min。
注意事项：
上清液蛋白质浓度需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。