酸性转化酶（AI）活性检测试剂盒（可见分光光度法）
产品货号：BA
产品规格：50管/24样
产品简介：
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适pH，将高等植物Ivr分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。AI(EC3.2.1.26)主要存在于细胞液泡或自由空间中，最适pH为4.5~5.0（酸性），通过降解液泡中蔗糖，调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。
AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在nm有特征光吸收，在一定范围内nm光吸收增加速率与AI活性成正比。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成：
溶液的配制：
1.试剂二：临用前加入30mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存；
2.标准品：10mg葡萄糖，临用前加入1mL蒸馏水溶解，制备10mg/mL葡萄糖标准液备用。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
2.标准品的制备：将标准液用蒸馏水稀释成1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0mg/mL葡萄糖标准液。
3.操作表：（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）：
混匀，煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，nm处记录各管吸光值A，ΔA=A测定-A对照。
三、AI活性计算
1.标准曲线的建立：
以各浓度下吸光值减空白管（浓度为0mg/mL）的吸光度为y轴，葡萄糖浓度为x轴绘制标准曲线。根据标准曲线，将ΔA带入方程得到x（mol/mL）。
2.AI活性计算：
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
AI活性（U/mgprot）＝(x×V1×)÷(V1×Cpr)÷T=33.3×x÷Cpr
（2）按样本质量计算
单位的定义：37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
AI活性（U/g质量）＝(x×V1×)÷(W×V1÷V2)÷T=33.3×x÷W
：单位换算系数，1mg/mL=g/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.2mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间：30min。
注意事项：
1.如果加入试剂三，煮沸10min后有混浊物出现，建议离心除去沉淀后，取上清测定吸光度；
2.如果吸光值大于1，可以用蒸馏水将样本稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数）。
3.由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。
实验实例：
1.取0.1g黄花芯加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=0.，ΔA对照=0.，ΔA=A测定-A对照=0.-0.=0.，带入标准曲线y=1.x-0.，计算x=（0.+0.）/1.=0.，按样本质量计算酶活得：
AI活性（U/g质量）＝33.3×x÷W＝33.3×0.÷0.1=86.U/g质量。