L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶（GalLDH）活性测定试剂盒说明书
微量法T/96S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
L-半乳糖途径是合成AsA的主要途径。GalLDH位于线粒体内膜，负责催化植物体内AsA生物合成的最后一步，也是该途径的关键酶之一，对植物体内AsA含量的积累起着至关重要的作用。
测定原理：
GalLDH催化L-半乳糖内酯还原细胞色素C(Cytc)，还原型Cytc在nm有吸收峰；测定还原型Cytc增加速率，来计算GalLDH活性。
自备仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶（棕色），4℃保存。临用前加入16mL蒸馏水，充分溶解。
试剂三：粉剂×1管，4℃保存。临用前加入2mL蒸馏水，充分溶解。
粗酶液提取：
照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
GalLDH测定操作：
1.分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到nm，蒸馏水调零。
2.试剂二在25℃水浴锅中预热30min。
3.依次在、微量玻璃比色皿/96孔板中加入20μL上清液、μL预热的试剂二和20μL试剂三，迅速混匀后于nm比色，记录10s和s的吸光值A1和A2，△A=A2﹣A1。
GalLDH活性计算公式：
使用96孔板测定的计算公式如下
(1).按蛋白浓度计算
GalLDH活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟还原1nmolCytc为1个酶活单位。
GalLDH(nmol/min/mgprot)=△A÷ε÷d×V反总×÷（Cpr×V样）÷T
=×△A÷Cpr
(2).按样本质量计算
GalLDH活性单位定义：25℃中每克样品每分钟还原1nmolCytc为1个酶活单位。
GalLDH(nmol/min/g鲜重)=△A÷ε÷d×V反总×÷（W×V样÷V样总）÷T
=×△A÷W
ε：还原型Cytc摩尔消光系数，17.3×L/mol/cm；d：96孔板光径(cm)，0.5cm；V反总：反应体系总体积，0.2mL=0.L；：1mol=1×nmol；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；V样总：提取液体积，1mL；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，蛋白质浓度需要另外测定，建议使用本公司蛋白质含量BCA试剂盒；T：反应时间，2min。
注意事项:
试剂二和试剂三配制好后3天内使用完。
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