淀粉酶活性检测试剂盒DNS比色法

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α-淀粉酶(α-AL)活性检测试剂盒(货号:AKSU)

α-淀粉酶(α-AL)普遍分布在动物、植物和微生物中,是一种重要的淀粉水解酶,能够以随机作用方式切断淀粉、糖原、寡聚或多聚糖分子内的α-1,4葡萄糖苷键,生成麦芽糖、低聚糖和葡萄糖等,是工业生产中应用最为广泛的酶制剂之一。

α-淀粉酶能够催化淀粉水解生成还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕红色物质,产物在nm处具有特征吸收峰,通过吸光值变化即可表征α-淀粉酶的活性。

α-淀粉酶活性检测原理

测定过程中所需要的仪器和试剂:可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴和蒸馏水。

1.淀粉酶原液的制备(可根据预实验结果适当调整样本量)

称取0.1g样本,加入1mL蒸馏水后充分匀浆,室温提取15min(每隔5min振荡混匀1次),g室温离心10min,吸取全部上清液使用蒸馏水定容至10mL,充分混匀即为淀粉酶原液。

吸光值测定:取反应液至1mL玻璃比色皿中,测定nm处吸光值,记为A测定、A对照、A标准和A空白;计算A测定=A测定-A对照,A标准=A标准-A空白。注:每个测定管均需设一个对照管,空白管只需测定1-2次。

标准曲线的建立:以0.2、0.1、0.05、0.、0.、0.mg/mL标准稀释液浓度为横坐标(x),以其对应的A标准为纵坐标(y),绘制标准曲线,得到线性回归方程y=kx+b,将A测定带入公式中得到x(mg/mL)。

注意事项

①若A测定超出标准线性吸光值范围:A若超过最高值,建议将淀粉酶原液适当稀释或减少样本量重新制备淀粉酶原液后再进行测定;B若低于最低值,建议更改淀粉酶原液制备过程中蒸馏水添加量或适当增加样本量重新制备淀粉酶原液后再进行测定,计算时相应修改;

②试剂二加入试剂三后可缓慢加热至煮沸,加热至溶液呈均一状态即可,若使用过程中出现沉淀70℃水浴加热溶解后再使用;

③为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准),确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定,过程中问题请您及时与工作人员联系。

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