植物挥发性脂肪酸的测定比色法

乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、异戊酸等广泛地存在于自然界中,它们的共同特点是具有较强的挥发性,生物学上一般称之为挥发性脂肪酸(VFA),今天我们来看看如何通过比色法测定植物中的挥发性脂肪酸。

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一、试剂

所有试剂除注明者外,均为分析纯。

1.1硫酸(1:1):浓硫酸加到相同体积的水中配制成稀硫酸。

1.2酸性乙二醇:取30.0ml乙二酸与4.0ml配制的稀硫酸混合。

1.34.5mol/LNaOH:称取18.0gNaOH溶于水中,冷却后定容至ml。

1.%盐酸羟胺溶液:称取10.0g盐酸羟胺溶于ml蒸馏水中。

1.5羟胺试剂:量取40ml4.5mol/LNaOH与10ml10%盐酸羟胺混合。

1.6酸性氯化铁试剂:称取20.0g氯化铁(FeCl3.6H2O)溶于ml水中,准确加入20ml浓硫酸,并稀释至1L。

1.7乙酸标准液:精确称乙酸(分析纯)1.g,稀释至ml,此标准液含乙酸10mg/mL。

二、主要仪器

万分之一分析天平、分光光度计、水浴锅

三、试样的制备

将沼液样品以-00r/min的离心条件下离心,得澄清的样品试液,备用。

四、分析步骤

4.1标准曲线绘制

准确吸取10mg/mL乙酸标准液1.0ml、5.0ml、10.0ml、15.0ml、20.0ml、25.0ml、30.0ml分别置于ml容量瓶中,以蒸馏水定容至刻度线,摇匀,即得ug/ml、ug/ml、0ug/ml、1ug/ml、ug/ml、2ug/ml、ug/ml的乙酸标准系列液。

分别吸取0.5ml乙酸标准系列液置于试管中,准确加入1.7ml酸性乙二醇试剂,充分混合,置于沸水浴中加热3min,.然后取出并置于冷水中冷却,加入2.5ml盐酸羟胺试剂,混匀,放置1min,然后每个管中加入10ml酸性氯化铁试剂,用水定容至25ml,混匀静置5min,用分光光度计在nm下测吸光度。

4.2挥发性脂肪酸含量测定

吸取0.5ml于试管中,应用的试剂和操作步骤同4.1。

4.3空白溶液制备

吸取0.5ml蒸馏水,应用的试剂和操作步骤同4.1

4.4若浓度较高,可进行稀释后再测定。

五、结果计算

挥发性脂肪酸含量(mg/L)=(C×V×0)/N

式中:

C--为从校准曲线或回归方程求得的挥发酸的含量,mg;

V--为测量液体积,ml;

N--为稀释倍数;

0--为换算因数。

来源:栢晖生物整理




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