过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒（紫外分光光度法）
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
产品货号：BA
产品规格：50管/48样
产品简介：
CAT(EC1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。
H2O2在nm下有特征吸收峰，CAT能够分解H2O2，使反应溶液nm下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。
产品内容：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体μL×3瓶，4℃保存。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备
细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（个）：提取液体积（ml）为-0:1的比例（建议万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（功率20%或w，超声3秒，间隔10秒。重复30次）；g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积（ml）为1：5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
二、CAT测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至nm处，蒸馏水调零。
2、CAT检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二中加入20mL试剂一，充分混匀，作为工作液；用不完的试剂4℃保存一周。
3、测定前将CAT检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min。
4、取1mLCAT检测工作液于1mL石英比色皿中，再加入35μL样本，混匀5s；室温下立即测定nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。计算ΔA=A1-A2
三、CAT活性计算：
1、血清（浆）CAT活力的计算:
单位的定义：每毫升血清（浆）在反应体系中每分钟催化1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mL)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×]÷V样÷T=×ΔA
2、组织、细菌或细胞中CAT活力计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mgprot)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×]÷（V样×Cpr）÷T=×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/g鲜重)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×]÷（W×V样÷V样总）÷T=×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞数量计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/cell)＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×]÷（×V样÷V样总）÷T=1.×ΔA
V反总：反应体系总体积，1.×10-3L；ε:H2O2摩尔吸光系数，4.36×L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.ml；V样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，1min。W，样本质量，g；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/ml；：细胞或细菌总数，万。